论文部分内容阅读
目的 探讨长链非编码RNA（lnc RNA）核富含丰富的转录本1（NEAT1）对癫痫细胞模型海马神经元凋亡的影响及作用机制,以期为NEAT1成为癫痫治疗的新靶点提供依据。方法 体外培养大鼠海马神经元细胞,无镁诱导制备癫痫海马神经元模型,实验分为:对照组（正常细胞外液）、模型组（无镁细胞外液）、转染对照组（转染非特异性siRNA+无镁细胞外液）和转染组（转染NEAT1特异性si RNA+无镁细胞外液）。实时荧光定量PCR（q PCR）检测NEAT1和miR-29b-3p的表达变化,双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1是否靶向调控miR-29 b-3p,酶联免疫吸附法（ELISA）检测白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,AnnexinV-FI TC/PI双染色法检测海马神经元细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法（Westernblot）检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、Toll样受体4（TLR4）和核因子-κB（NF-κB）的表达水平。结果 与对照组相比,模型组海马神经元凋亡率及NEAT1、Bax、TLR4和NF-κB的表达水平升高（F=50.980、73.668、65.635、13.203、10.292,P<0.05）,IL-1、IL-6和TNF-α的含量增多（F=33.107、33.857、51.129,P<0.05）,miR-29 b-3p和Bcl-2的表达水平降低（F=145.023、67.655,P<0.05）;而抑制NEAT1的表达能够降低神经元凋亡,抑制Bax、TLR4和NF-κB的表达,促进miR-29 b-3p和Bcl-2的表达,减少IL-1、IL-6和TNF-α的分泌。双荧光素酶报告基因实验证实NEAT1和miR-29 b-3p的靶向关系。结论 lncRNA NEAT1靶向下调miR-29 b-3p的表达阻断TLR4/NF-κB信号通路来抑制癫痫模型海马神经元的凋亡。