【摘 要】
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目的 建立并鉴定表达人乳头瘤病毒16型(HPV 16)E7蛋白的实体瘤模型.方法 携带有野生型HPV 16 E7基因的重组质粒pcDNA3.1-E7用限制性内切酶及序列测定进行鉴定.采用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-E7转染小鼠淋巴瘤细胞RMA,经G418筛选获得稳定转染细胞单克隆,并用RT-PCR方法检测稳定转染细胞HPV 16 E7 mRNA.将转染细胞接种于C57BL/6小鼠,肿瘤形成后
【机 构】
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430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科,430022,
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目的 建立并鉴定表达人乳头瘤病毒16型(HPV 16)E7蛋白的实体瘤模型.方法 携带有野生型HPV 16 E7基因的重组质粒pcDNA3.1-E7用限制性内切酶及序列测定进行鉴定.采用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-E7转染小鼠淋巴瘤细胞RMA,经G418筛选获得稳定转染细胞单克隆,并用RT-PCR方法检测稳定转染细胞HPV 16 E7 mRNA.将转染细胞接种于C57BL/6小鼠,肿瘤形成后,用Western blot分析检测E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达.结果 酶切及测序证实目的 基因DNA序列、插入位点及方向均正确.RT-PCR检测显示HPV 16 E7能在RMA转染细胞中稳定表达.RMA转染细胞可在小鼠体内成瘤,且Western blot分析表明E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达较体外高.结论 2.5 X 104 个RMA-E7细胞可在小鼠体内成瘤,并且体内E7蛋白表达比体外高,可能导致免疫耐受。
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