【摘 要】
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目的获取具有生物活性的狂犬病病毒核蛋白在大肠埃希菌表达系统中高效表达。方法实验使用密码子优化技术重新编码狂犬病病毒CTN-1株核蛋白基因，人工合成全长基因并克隆至pET-43.1a表达载体，在大肠埃希菌BL21(DE3)株中诱导表达，并使用Western blot检测其反应原性。结果诱导后SDS-PAGE分析显示在相对分子质量50×103处出现明显的表达条带，与预期蛋白质条带大小一致。其中在大肠埃
【机 构】
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中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，卫健委生物安全重点实验室，北京 102206;中国科学院生物安全大科学研究中心，武汉 430071,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，卫健委生物安全重点实验室
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目的获取具有生物活性的狂犬病病毒核蛋白在大肠埃希菌表达系统中高效表达。
方法实验使用密码子优化技术重新编码狂犬病病毒CTN-1株核蛋白基因，人工合成全长基因并克隆至pET-43.1a表达载体，在大肠埃希菌BL21(DE3)株中诱导表达，并使用Western blot检测其反应原性。
结果诱导后SDS-PAGE分析显示在相对分子质量50×103处出现明显的表达条带，与预期蛋白质条带大小一致。其中在大肠埃希菌A600为0.5左右，37℃诱导5 h时表达产量最高(约为32.3%)。大量表达时核蛋白的表达形式主要为包涵体，后经Ni2+螯合层析纯化，获得纯度为95%以上的目的蛋白。纯化产物经Western blot鉴定，与疫苗免疫小鼠血清呈阳性反应，表明大肠埃希菌表达CTN-1株核蛋白具有生物活性。
结论本实验成功建立了CTN-1株核蛋白在大肠埃希菌表达系统的高效表达方法，并获得了高纯度目的蛋白，为进一步的临床诊断和新型疫苗制备提供基础资料。
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