【摘 要】
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目的 构建ZIKA病毒E蛋白膜外区(E80)的原核表达质粒,对重组蛋白E80进行表达、 纯化和鉴定.方法 以重组质粒pCMV-S-ZIKA_ME为模板,利用PCR扩增E80基因片段并将其插入原核表达
【机 构】
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山西大学生物技术研究所教育部化学生物学与分子工程重点实验室 太原市, 030006
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目的 构建ZIKA病毒E蛋白膜外区(E80)的原核表达质粒,对重组蛋白E80进行表达、 纯化和鉴定.方法 以重组质粒pCMV-S-ZIKA_ME为模板,利用PCR扩增E80基因片段并将其插入原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-ZIKA-E80,转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,采用Ni+柱亲和层析法纯化蛋白,Western印迹检测蛋白特异性.结果 重组质粒pET-28a-ZIKA-E80经双酶切验证构建正确,且测序结果与原序列一致.E80成功的以包涵体的形式表达,大小为45 kD且与预期一致.亲和层析纯化后纯度达到95％以上,能被ZIKA病毒E蛋白抗体特异性识别.结论 成功构建了能高效表达E80的基因工程菌,纯化后的目的蛋白纯度高、特异性好,为ZIKA病毒疫苗和E蛋白的结构与功能的研究奠定了基础.
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