【摘 要】
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目的 建立一种LAMP分子鉴别检测体系,应用于10种食源性疾病病原体的分子鉴别检测.方法 针对8种细菌(沙门菌属、志贺菌属、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHECO157:H7、奇异
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目的 建立一种LAMP分子鉴别检测体系,应用于10种食源性疾病病原体的分子鉴别检测.方法 针对8种细菌(沙门菌属、志贺菌属、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHECO157:H7、奇异变形杆菌、霍乱弧菌和单增李斯特菌)和2种病毒(Norwalk病毒和轮状病毒)分别建立LAMP和RT-LAMP方法,分别对25种常见肠道细菌和病毒进行LAMP扩增,水浴箱内65℃扩增60 min(LAMP)或120 min(RT-LAMP),扩增完成后利用电泳和肉眼进行结果判断.对365份食源性疾病患者呕吐物、肛拭子和食品等标本进行10种食源性疾病病原体LAMP分子检测.结果 10种食源性疾病病原体LAMP或RT-LAMP方法均只对靶病原体出现阳性结果,电泳显示为LAMP特异性梯状条带,加SYBRGreenⅠ后肉眼观察反应液变为绿色;8种细菌性病原体LAMP检测方法的敏感度为3×100～1.2×102 cfu/ml,其中6种LAMP方法敏感度高于PCR方法,其他病原体(霍乱弧菌、EHEC O157:H7、Norwalk病毒和轮状病毒)敏感度与PCR方法相同.从365份标本中检出沙门菌属11份、志贺菌属6份、金黄色葡萄球菌13份、EHEC O157:H7 2份、副溶血性弧菌2份、单增李斯特菌2份、Norwalk病毒12份和轮状病毒7份.结论 建立了一个较为完整的LAMP分子鉴别检测体系,可以在一台水浴箱内同时对10种食源性疾病病原体进行高通量的分子鉴别检测,具有快速、不需要特殊仪器和肉眼判断结果的优势,适合基层单位的实验室开展食源性疾病的分子鉴别诊断.
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