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以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) ORF5保守区域为靶基因,基于SYBR Green构建了以RNA为模板、反转录和PCR扩增一步完成的荧光定量RT-PCR (qRT-PCR)方法.该方法对质粒和细胞培养物中病毒的检测限分别为1×100 copies/μL和1×10-2 TCID50/mL;组内和组间差异系数(CV)均小于5％.利用本方法检测126份临床组织样品,PRRSV阳性率为42.06％,与传统RT-PCR检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.918),且敏感性显著高于传统RT-PCR.本研究建立的qRT-PCR方法为猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断提供了技术手段.