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目的探讨过表达FHIT基因对FHIT基因含量不一致的人肝癌细胞株Hep G2、Hep3B和Huh7的增殖、凋亡和细胞侵袭以及细胞周期的影响,以期证实FHIT基因在肝癌细胞株的表达差异与肝癌细胞的分化有密切相关性.方法体外成功构建p LVX-IRES-FHIT慢病毒重组载体转染FHIT基因含量不一致的肝癌细胞株Hep G2、Hep3B和Huh7,以MTT法、FCM法、Annexin V/PI双染色法、细胞周期检测技术和Transwell侵袭实验分析过表达的FHIT基因对三系肝癌细胞的增殖活性、凋亡、细胞侵袭性和细胞周期的影响机制及其生物学效应与时间梯度的关系.结果体外成功构建重组慢病毒载体p LVX-IRES-FHIT转染FHIT含量不一致的肝癌细胞株Hep G2、Hep3B和Huh7.(1)MTT法检测显示三系肝癌细胞株的p LVX-IRES-FHIT组细胞增殖活性明显降低,且随时间推移细胞增殖抑制效果更为显著,在48 h达到高峰,此后到72 h进入平台期,对照组细胞增殖抑制不明显(P<0.05).Annexin V/PI双染色法检测发现p LVX-IRES-FHIT组三系肝癌细胞48 h凋亡率较对照组差异无统计学意义(P>0.05).三系肝癌细胞中对p LVX-IRES-FHIT组转染致FHIT基因过表达抑制增殖活性大小的顺序依次是Hep G2>Hep3B>Huh7;(2)经过Transwell侵袭实验表明对FHIT基因过表达对三系肝癌细胞的p LVX-IRES-FHIT组侵袭性均有明显的抑制作用(P<0.05),而对照组未见明显差异(P>0.05).三系肝癌细胞的侵袭性顺序依次为Hep G2>Hep3B>Huh7;(3)细胞周期检测发现p LVX-IRES-FHIT组G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,增殖指数减低,在Hep G2细胞中与对照组间有统计学意义(P<0.05),在Hep B和Huh7细胞中与对照组间无统计学意义(P>0.05).FHIT基因的过表达对三系肝癌细胞的细胞周期影响为细胞周期停滞于S期,且G0/G1期细胞增多的顺序依次是Hep G2 0.05) Hep G2> Hep3B> Huh7 was the order in which FHIT gene was overexpressed in hepatocellular carcinoma cells transfected with p LVX-IRES-FHIT group. (2) Transwell invasion assay showed that FHIT gene overexpression on three-line hepatocellular carcinoma The invasiveness of p LVX-IRES-FHIT group was significantly inhibited (P <0.05), but there was no significant difference in the control group (P> 0.05) .The invasion sequence of three-line hepatocellular carcinoma cells was Hep G2> Hep3B > Huh7; (3) Cell cycle analysis showed that there was an increase in G0 / G1 phase cells, a decrease in S phase cells and a decrease in proliferation index in p LVX-IRES-FHIT group, which was statistically significant between Hep G2 cells and the control group ) Was not significantly different between Hep B and Huh7 cells and the control group (P> 0.05) .The over-expression of FITC showed the cell cycle arrest in S phase and the G0 / G1 phase The order of cell proliferation was Hep G2
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