论文部分内容阅读
目的：研究苓桂术甘汤（LGZGD）含药血清对H2O2诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及与PI3K/Akt信号通路的关系。方法：采用血清药理学方法，制备空白血清及苓桂术甘汤含药血清。体外培养H9c2细胞，分为正常组、H2O2组、20%空白血清组、20%LGZGD含药血清组，给予相应药物处理12 h，再加入100 μmol·L-1 H2O2继续培养6 h后进行检测。采用CCK8法试剂检测20%LGZGD含药血清对H2O2诱导的H9c2细胞增殖活性的影响，荧光探针法检测线粒体活性氧（ROS）水平，比色法检测氧化应激标志物丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt mRNA水平，流式细胞术检测细胞凋亡率。加入PI3K抑制剂LY294002后对线粒体ROS、LDH、GSH-Px水平， PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达及细胞凋亡率进行检测。结果：与正常组比较，H2O2诱导后细胞活力明显降低（P<0.01），线粒体ROS、MDA及LDH水平显著增加（P<0.01），CAT、GSH-Px水平则显著下降（P<0.01），PI3K、Akt蛋白的磷酸化及mRNA水平表达降低（P<0.05， P<0.01），细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。与H2O2组比较，苓桂术甘汤含药血清能够提高H9c2细胞活力，降低线粒体ROS、MDA及LDH水平（P<0.01），并提高CAT、GSH-Px水平（P<0.01）促进PI3K、Akt的磷酸化及mRNA的表达（P<0.05， P<0.01），减少细胞凋亡率（P<0.01）。苓桂术甘汤含药血清与抑制剂LY294002联用后，逆转了苓桂术甘汤含药血清对H9c2细胞的上述作用（P<0.05， P<0.01）。结论：苓桂术甘汤含药血清保护H2O2诱导的H9c2细胞损伤可能与调控PI3K/Akt信号通路减轻氧化应激及细胞凋亡有关。