研究表皮葡萄球菌生物膜抑制肽(简称抑制肽)对表皮葡萄球菌早期黏附及生物膜形成的影响。
方法采用多肽合成仪合成抑制肽,其纯度为96.8%、相对分子质量为874.4。(1)采用终浓度为1~256 μg/mL的抑制肽培养表皮葡萄球菌ATCC 35984(下同)菌液,不含菌液的M-H肉汤为空白对照,观察抑制肽对该菌的MIC(样本数为3)。(2)采用含终浓度为16、32、64、128、256 μg/mL抑制肽的胰蛋白胨大豆肉汤(TSB)培养液培养表皮葡萄球菌菌液(设为相应浓度抑制肽组),以TSB培养基培养前述菌液作为阴性对照组,从培养即刻起每小时观察该菌的生长情况(结果以吸光度值表示),绘制该菌培养24 h内的生长曲线(每组各时相点样本数为3)。(3)采用含终浓度为16、32、64、128、256 μg/mL抑制肽的TSB培养液培养表皮葡萄球菌菌液(设为相应浓度抑制肽组),以TSB培养基培养前述菌液作为阴性对照组,培养4 h检测该菌黏附情况,培养20 h检测该菌生物膜的形成情况(结果均以吸光度值表示,样本数均为10)。(4)采用含128 μg/mL抑制肽的TSB培养液培养表皮葡萄球菌菌液(设为128 μg/mL抑制肽组),以TSB培养基培养前述菌液作为阴性对照组,培养24 h后采用激光扫描共聚焦显微镜观察该菌的黏附与生物膜形成情况(样本数为3)。对数据行单因素方差分析、LSD检验、Dunnett T3检验。
结果(1)抑制肽对表皮葡萄球菌的MIC大于256 μg/mL。(2)与阴性对照组比较,各浓度抑制肽组表皮葡萄球菌培养24 h内的生长曲线无明显变化。(3)256、128、64、32 μg/mL抑制肽组培养4 h表皮葡萄球菌的黏附情况分别为0.20±0.04、0.27±0.03、0.35±0.04、0.40±0.04,明显少于阴性对照组(0.53±0.10,P<0.05或P<0.01);16 μg/mL抑制肽组培养4 h该菌的黏附情况(0.47±0.09)与阴性对照组相近(P>0.05)。256、128、64 μg/mL抑制肽组培养20 h的表皮葡萄球菌生物膜形成情况分别为0.49±0.10、0.68±0.06、0.93±0.13,明显少于阴性对照组(1.21±0.18,P<0.05或P<0.01);32、16 μg/mL抑制肽组培养20 h该菌生物膜形成情况分别为1.18±0.22、1.15±0.26,与阴性对照组相近(P值均大于0.05)。(4)激光扫描共聚焦显微镜显示,培养24 h后阴性对照组黏附的表皮葡萄球菌较多,形成的生物膜结构致密;128 μg/mL抑制肽组黏附的表皮葡萄球菌较少,形成的生物膜结构较为疏松。
结论抑制肽能显著抑制表皮葡萄球菌早期黏附及生物膜形成,但其结构需要进一步修饰。