【摘 要】
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目的 构建人ZHX2功能片段的真核融合表达载体.方法 以舍有全长ZHX2基因的pcDNA3.0-ZHX2-HA质粒为模板,PCR扩增人ZHX2基因功能片段(242-501AA),经EcoRI,KpnⅠ双酶切后克隆入pc
【机 构】
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山东大学医学院免疫学研究所,济南,250012
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目的 构建人ZHX2功能片段的真核融合表达载体.方法 以舍有全长ZHX2基因的pcDNA3.0-ZHX2-HA质粒为模板,PCR扩增人ZHX2基因功能片段(242-501AA),经EcoRI,KpnⅠ双酶切后克隆入pcDNA3.0,构建真核表达载体pZHX2(242-501)-HA,通过酶切及测序鉴定其正确性.利用脂质体将pcDNA3.0和含有ZHX2功能片段的真核表达载体分别转染肝癌细胞系HepG2.2.15和非洲绿猴肾细胞COS-7,Western blot检测人ZHX2功能片段融合蛋白的表达.结果 电泳结果显示:PCR扩增的ZHX2基因242-501AA片段大小与预期相符,重组质粒经双酶切和DNA测序,证明其与GenBank报道序列一致.Western blot结果显示,ZHX2功能片段的融合蛋白在肝癌细胞系HepC2.2.15和非洲绿猴肾细胞COS-7中均可有效表达.结论 成功构建含有ZHX2功能片段的真核融合表达载体,为进一步探讨ZHX2基因的功能机制及其应用奠定了基础.
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