【摘 要】
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福尔马林固定标本是宝贵的遗传资源,但是如何有效利用其中的遗传信息一直存在问题.本文尝试从标本预处理、消化、PCR扩增各方面综合考虑和优化改进,成功提取并扩增21头福尔马
【机 构】
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中国科学院水生生物研究所,武汉,430072中国科学院研究生院,北京,100039;浙江大学濒危野生动物保护遗传与繁殖教育部重点实验室,杭州,310029;中国科学院水生生物研究所,武汉,430072
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福尔马林固定标本是宝贵的遗传资源,但是如何有效利用其中的遗传信息一直存在问题.本文尝试从标本预处理、消化、PCR扩增各方面综合考虑和优化改进,成功提取并扩增21头福尔马林固定白暨豚标本线粒体DNA控制区410 bp片段.采用了3种预处理方法尽量去除固定标本中残存的甲醛,从试验结果来看,从酒精梯度+临界点干燥处理的标本中提取的DNA在扩增时具有明显优势.通过蛋白酶K消化过程中对于酶的浓度、温浴时间的比较试验,发现随着采用大幅提高酶浓度、延长消化时间等高强度的蛋白酶消化操作后,DNA的质量和产量均得到显著提高.针对标本DNA降解严重的特点,设计特异性好且长度合适的引物以及使用巢式引物扩增,均提高了标本DNA扩增的特异性和灵敏度.通过对所测得的21头白暨豚线粒体DNA控制区部分序列的对比,发现全部个体在该片段上的序列完全一致,说明白暨豚遗传多样性极低.
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