【摘 要】
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为探讨小鼠DDX5的结构特征及生物学功能,本研究采用RT-PCR技术从小鼠脾淋巴细胞中克隆DDX5基因,通过生物信息学软件分析DDX5的遗传演化关系和结构特征,并运用荧光定量PCR检测小鼠DDX5基因的组织表达谱;进一步将DDX5基因亚克隆至真核表达载体pCMV-Tag2B,通过Western-blot验证表达后,采用双荧光素酶报告系统检测过表达DDX5对NF-κB和IFN-β启动子激活活性的影响.研究结果显示,小鼠DDX5基因开放阅读框全长1848 bp,编码615个氨基酸,与其它动物的DDX5氨基酸序
【机 构】
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安康学院现代农业与生物科技学院,安康,725000;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,兰州,730046
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为探讨小鼠DDX5的结构特征及生物学功能,本研究采用RT-PCR技术从小鼠脾淋巴细胞中克隆DDX5基因,通过生物信息学软件分析DDX5的遗传演化关系和结构特征,并运用荧光定量PCR检测小鼠DDX5基因的组织表达谱;进一步将DDX5基因亚克隆至真核表达载体pCMV-Tag2B,通过Western-blot验证表达后,采用双荧光素酶报告系统检测过表达DDX5对NF-κB和IFN-β启动子激活活性的影响.研究结果显示,小鼠DDX5基因开放阅读框全长1848 bp,编码615个氨基酸,与其它动物的DDX5氨基酸序列同源性非常高(87.7％～98.8％);在小鼠DExD/H解旋酶家族中,DDX5与DDX17遗传距离最近,且与DDX41和DDX3位于同一大支;结构分析显示,DDX5具备典型的DExD核心域和解旋酶C端结构域,但不具备Cas-pase募集结构域和RIG-Ⅰ样C端结构;DDX5基因在小鼠心脏表达最高,在外周血淋巴细胞和小肠中表达最低;构建的DDX5真核表达载体能转染HEK293T细胞并成功表达,可显著增强激活NF-κB起始的相对荧光素酶活性,但对IFN-β启动子起始的相对荧光素酶活性无影响.上述结果表明,DDX5可能具有免疫调节的功能,并且参与了NF-κB介导的信号通路,进而为探究鼠源DDX5在病毒感染和免疫学中的作用奠定基础.
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