【摘 要】
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目的:建立抗鼠疫F1嵌合抗体的稳定表达细胞系,表达并纯化嵌合抗鼠疫F1抗体并鉴定其活性.方法:提取鼠源杂交瘤细胞株4C6总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),逆转录为互补脱氧核糖核酸(complementary DNA,cDNA),通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得抗F1抗体轻链、重链可变区基因,全基因合成嵌合抗体的重链和轻链基因,并克隆于真核表达载体pMH3质粒中,共转染入中国仓鼠卵巢上皮细胞-S(Chinese hamster ova
【机 构】
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东部战区总医院秦淮医疗区肝病科教研室,安徽医科大学八一临床学院,江苏南京210001;东部战区疾病预防控制中心,江苏南京210002
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目的:建立抗鼠疫F1嵌合抗体的稳定表达细胞系,表达并纯化嵌合抗鼠疫F1抗体并鉴定其活性.方法:提取鼠源杂交瘤细胞株4C6总核糖核酸(ribonucleic acid,RNA),逆转录为互补脱氧核糖核酸(complementary DNA,cDNA),通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得抗F1抗体轻链、重链可变区基因,全基因合成嵌合抗体的重链和轻链基因,并克隆于真核表达载体pMH3质粒中,共转染入中国仓鼠卵巢上皮细胞-S(Chinese hamster ovary cell-S,CHO-S)中,经遗传霉素(ge-neticin,G418)筛选得到稳定表达F1嵌合抗体的细胞株,悬浮培养后收集上清并亲和纯化.采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测其与F1抗原的特异性结合能力;通过竞争性ELISA比较嵌合抗体和鼠源亲本抗体与抗原的结合能力,同时测定抗体亲和力和质谱分析抗体特性.结果:成功获得稳定分泌抗鼠疫抗原F1嵌合抗体的稳定表达细胞系,该抗体能够特异性结合F1抗原,抗体的亲和力为2.303× 10-9 mol/L.结论:成功制备了抗体鼠疫F1的嵌合抗体,为后续动物体内实验及临床药物研发奠定了基础.
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