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[摘要] 目的 探討蛋白酶抑制剂联合连续肾脏代替治疗（CRRT）对脓毒症患者心型脂肪酸结合蛋白（FABP3）、糖原磷酸化酶同工酶BB（GPBB）水平的影响。 方法 选取2019年2月至2020年6月我院收治的脓毒症患者134例，按照随机数字表法分为CRRT组与联合治疗组，每组各67例。其中CRRT组患者进行CRRT治疗，联合治疗组患者进行CRRT联合蛋白酶抑制剂进行治疗。使用流式细胞仪对CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标水平进行测定与比较，采用酶联免疫法检测白介素-8（IL-8）、肿瘤细胞因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）及脂肪酸结合蛋白3（FABP3）、糖原磷酸化酶同工酶BB（GPBB）水平，并比较，免疫组化法检测D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）水平，并对两组患者治疗疗效进行评价。 结果 治疗后，与CRRT组相比，联合治疗组CD4+指标水平与CD4+/CD8+均较高，CD8+指标水平较低（P<0.05）;与CRRT组相比，联合治疗组IL-8、TNF-α、IL-6水平均较低（P<0.05）;联合治疗组D-乳酸水平及DAO水平均低于CRRT组（P<0.05）;与CRRT组相比，联合治疗组FABP3水平较高、GPBB水平较低（P<0.05）;与CRRT组相比，联合治疗组治疗总有效率较高（P<0.05）。 结论 使用蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，能够显著改善患者免疫功能，抑制炎症反应，同时能够降低肠道黏膜损害程度，使得FABP3水平升高、GPBB水平降低，从而减轻脓毒症患者心肌损伤程度。
[关键词] 蛋白酶抑制剂;脓毒症;连续性肾脏替代疗法;白介素-8;心型脂肪酸结合蛋白;糖原磷酸化酶同工酶BB
[中图分类号] R593.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2021）24-0006-04
Effect of protease inhibitors combined with CRRT on FABP3 and GPBB levels in patients with sepsis
WANG Miaoshu1 SONG Yukang1 SUN Renhua2 YANG Xianghong2
1.Department of Intensive Care Unit， the First People′s Hospital of Wenling City in Zhejiang Province， Wenling 317500， China; 2.Department of Intensive Care Unit， Zhejiang Provincial People′s Hospital， Hangzhou 310014， China
[Abstract] Objective To explore the effect of protease inhibitors combined with continuous renal replacement therapy （CRRT） on heart fatty acid binding protein （FABP3） and glycogen phosphorylase isoenzyme BB （GPBB） levels in patients with sepsis. Methods A total of 134 patients with sepsis admitted to our hospital from February 2019 to June 2020 were selected and divided into the CRRT group and the combined treatment group according to the random number table，with 67 cases in each group. Patients in the CRRT group were treated with CRRT，and patients in the combined treatment group were treated with CRRT combined with protease inhibitors. The levels of CD4+， CD8+ and CD4+/CD8+ were measured and compared by flow cytometry. The levels of interleukin-8 （IL-8）， tumor cytokine-α（TNF-α）， interleukin-6 （IL-6）， fatty acid binding protein 3 （FABP3）， and glycogen phosphorylase isoenzyme BB （GPBB） were measured and compared by enzyme-linked immunosorbent assay.The levels of D-lactate and diamine oxidase （DAO） were measured by immunohistochemistry. The therapeutic efficacy was evaluated in the two groups. Results After treatment，compared with the CRRT group， CD4+ level and CD4+/CD8+ were higher and CD8+ level was lower in the combined treatment group（P<0.05）. Compared with the CRRT group， IL-8，TNF-α and IL-6 levels were lower in the combined treatment group（P<0.05）. D-lactate level and DAO level were lower in the combined treatment group（P<0.05）.Compared ith the CRRT group， the FABP3 level was higher and the GPBB level was lower in the combined treatment group（P<0.05）. The total treatment response rate was higher in the combined treatment group（P<0.05）. Conclusion Protease inhibitors combined with CRRT in the treatment of patients with sepsis can significantly improve the immune function， inhibit the inflammatory response，reduce the degree of intestinal mucosal damage， increase the level of FABP3 and decrease the level of GPBB， thereby reducing the degree of myocardial injury in patients with sepsis. [Key words] Protease inhibitors; Sepsis; Continuous renal replacement therapy; Interleukin-8; Heart-type fatty acid binding protein; Glycogen phosphorylase isoenzyme BB
脓毒症作为全身性的一种由炎症反应介导的疾病，能够由大手术、烧伤、创伤及感染等多种因素所诱发[1]。其特点为病情危重、预后较差等，同时是临床上较为常见的危重疾病[2]。当患者脓毒症较为严重时，常合并有脓毒性休克及机体器官功能障碍，进而增加患者病死率，最高达到70%[3]。相关研究显示，脓毒症主要是由炎症反应增加、胃肠道功能出现障碍及免疫功能出现低下等较多因素所引起[4]。关于脓毒症的治疗具有一定的难度，当患者出现少尿、酸中毒及意识改变等，即为严重脓毒症[5]。有效的抑制炎症反应是治疗脓毒症的关键，乌司他丁作为从人尿中所分离的一种广谱蛋白酶抑制剂，能够有效抑制多种糖类及脂类的水解酶及蛋白酶活性，同时能够抑制促炎因子的过度释放[6]。连续性肾脏替代疗法（Continuous renal replacement therapy，CRRT）能够以超滤、吸附及滤过等多种步骤对炎症因子、有毒物质进行有效清除，对代谢紊乱进行平衡，并稳定内环境，在肾脏疾病中得到广泛治疗。本研究应用蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，并观察其治疗效果，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2019年2月至2020年6月我院收治的脓毒症患者134例，按照随机数字表法分为CRRT组与联合治疗组，每组各67例。CRRT组男36例，女31例，年龄52～63岁，平均（53.5±8.4）岁;联合治疗组男32例，女35例，年龄53～64岁，平均（54.5±6.8）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究所有患者及家属均知情同意，并获得我院医学伦理委员会批准。
纳入标准：全部患者均符合中国医师协会急诊医师分会，中国研究型医院学会对脓毒症的诊断标准[8]。排除标准：①近期进行过免疫抑制剂、激素、抗生素等类型药物治疗者;②合并血液系统及神经系统疾病者;③合并出现慢性疾病终末期及胃肠道恶性肿瘤者;④合并严重心脑血管相关受损者;⑤对本研究所使用药物不耐受或抵抗者;⑥资料不齐全者。
1.2 方法
患者在入院后均根据病因给予常规治疗，其中包括液体复苏、抵抗感染及生命支持。对脏器功能进行保护及对内环境进行纠正等。根据常规基础，CRRT组进行CRRT治疗，应用德国O3血液净化仪进行血液净化，选择分子肝素钙进行抗凝，具体操作为：使用双腔导管将其留置在颈内静脉或股静脉中，建立起血管通道，以进行前稀释与连续性静脉-静脉血液的滤过方法对患者连续治疗24 h，将血流量设置为160～250 mL/min。联合治疗组在CRRT组治疗的基础上增加蛋白酶抑制剂进行治疗，蛋白酶抑制剂选择乌司他丁（广东天普生化公司，国药准字H19990133;规格：20 mg/支）进行治疗，使用10 mL氧化钠注射液对100 000 U乌司他丁进行溶解后，静脉滴注，以每日2次连续应用1周，同时根据病情及症状进行酌量的增减。
1.3 观察指标及评价标准
1.3.1 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标水平检测 患者均在清晨空腹抽取静脉血3 mL，使用流式细胞仪对CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标水平进行测定。FACSV antage流式细胞仪购自BD公司，由高资历医师进行检测两组患者治疗前及治疗后细胞免疫指标Th1、Th2和Th1/Th2指标变化情况。
1.3.2 酶联免疫法检测IL-8、TNF-α、IL-6、FABP3、GPBB水平 在聚苯乙烯的反应孔内加入50 mm碳酸盐包缓冲液稀释后进行抗原，在加盖处理后，于4℃冰箱内存放24 h，在第2天进行3次洗涤，后抛干，将稀释液（pH值为7.4 0.02 mol/L Tris-HCl缓冲液）稀释的待测标本0.1 mL放入每个孔中，同时放入阳性和阴性对照标本，存放在42℃环境中60 min，移除液体后，进行3次洗涤并抛干，在每个孔中放入IL-6、TNF-α、IL-8及FABP3、GPBB抗体0.1 mL，存放60 min，移除液体后，进行3次洗涤并抛干，在每个孔中放入底物液（0.1 mol/L的Na2HPO4，0.05 mol/L的枸橼酸），混匀之后放入0.1 mL邻苯二胺，进行20 min遮光，再一次放入2 mol/L H2SO4 0.05 mL放置在每个孔内，终止反应。最后使用酶标仪检测A值测定IL-6、TNF-α、IL-8及FABP3、GPBB水平。
1.3.3 免疫組化法检测D-乳酸、DAO水平 以PBS作为阴性对照，当细胞膜或细胞浆呈棕黄色或棕褐色为CK19染色阳性信号。将组织蜡块进行石蜡切块，将厚度切为4 μm，常规脱蜡、脱水，进行抗原修复，除去离子水孵化，并滴加D-乳酸、DAO为一抗，在4℃置放12 h，进行2次PBS清洗，同时滴加聚合酶辅助剂，37℃下水浴，进行持续孵化，时间为20 min;2次PBS清洗，并进行滴加IgG多聚体。在37℃下水浴，进行持续孵化，时间为30 min。后计算出D-乳酸、DAO水平。
1.3.4 疗效标准 参照卢武等[7]研究中疗效评价标准并做出适当改动，对两组治疗效果进行判定，其中显效为患者发热、心动过速及水肿等症状消失，炎症指标、器官障碍参数等恢复正常水平;有效为患者发热、心动过速及水肿等症状得到改善，炎症指标、器官障碍参数等接近正常水平;无效为患者症状及体征未出现好转或出现恶化。总有效率=（有效例数+显效例数）/总例数×100%。 1.4 统计学方法
采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析。计量资料比较进行重复测量数据方差分析，组间两两进行比较以独立t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组治疗前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标水平比较
治疗前，两组患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后，两组患者CD4+指标水平与CD4+/CD8+水平上升，CD8+指标下降，且与CRRT组相比，联合治疗组CD4+指标水平与CD4+/CD8+均较高，CD8+指标水平较低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 两组治疗前后IL-8、TNF-α、IL-6水平比较
治疗前，两组IL-8、TNF-α、IL-6水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后，两组患者IL-8、TNF-α、IL-6水平均有所下降，且與CRRT组相比，联合治疗组IL-8、TNF-α、IL-6水平均较低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
2.3 两组治疗前后D-乳酸、DAO水平比较
治疗前，两组患者D-乳酸、DAO水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后，两组患者D-乳酸、DAO水平下降，联合治疗组D-乳酸水平及DAO水平均低于CRRT组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。
2.4 两组治疗前后FABP3、GPBB水平比较
治疗前，两组患者FABP3、GPBB水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后，两组患者FABP3水平上升，GPBB水平下降，且与CRRT组相比，联合治疗组FABP3水平较高、GPBB水平较低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。
2.5 两组疗效比较
联合治疗组总有效率高于CRRT组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表5。
3 讨论
重症脓毒症常伴有脓毒性休克或器官功能衰竭，这也是导致病死率较高的重要原因[9-10]。CRRT是临床常用的治疗脓毒症的重要手段，其具有快捷且有效的特点[11]。能够通过体外循环对炎症介质与内毒素进行连续性清除，有效阻止炎症反应损伤加重及肠黏膜屏障功能障碍，同时对免疫功能起到调节的作用。而乌司他丁作为广谱蛋白酶抑制剂，在稳定白细胞膜与溶解体膜中发挥重要作用，并能够有效抑制促炎因子的释放，减轻炎症反应损伤[12]。
本研究显示，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT治疗的脓毒症患者CD4+、CD4+/CD8+水平上升，CD8+水平下降。脓毒症伴随的免疫抑制是威胁患者预后的主要原因[13]。有研究显示，随着脓毒症发生发展，患者免疫系统出现紊乱，致使感染得不到有效控制，这也是导致病情不断恶化的重要因素[14]。T淋巴细胞的凋亡是导致脓毒症患者免疫功能发生紊乱的主要原因。CD4+、CD8+在正常情况下二者动态为平衡情况下，当CD4+/CD8+比值下降则说明细胞的免疫功能为低下状态[15-16]。本研究显示，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，能够调控T淋巴细胞亚群水平，调节患者细胞免疫功能，改善免疫系统紊乱状况，从而起到提升治疗效果，改善患者预后的作用。
本研究显示，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT治疗的脓毒症患者IL-8、TNF-α、IL-6水平下降。炎症介质在脓毒症发生发展中发挥重要作用，当脓毒症中出现感染，将会激活炎症反应，进而使大量炎症因子得到释放[17-18]。内源性炎症介质在相互作用下，使得对全身系统及器官造成损伤。IL-8、TNF-α、IL-6为广谱的炎症因子，三者水平变化参与机体炎症反应发生发展。本研究结果显示，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，能够抑制炎症反应严重程度，出现这一研究结果的原因可能是蛋白酶抑制剂乌司他丁具有抑制促炎因子释放，减轻炎症反应损伤程度的作用。
D-乳酸在发生全身感染、缺血再灌注及肠道缺血中，其水平得到升高。其主要是由肠道黏膜通透性增高所引起[19]。因此，D-乳酸能够有效反映肠道黏膜损害程度及通透性变化。DAO属于肠道黏膜上层的绒毛中有着高度活性的细胞酶，能够在组胺与多种多胺的代谢中发挥作用。当肠黏膜细胞出现受损，DAO将得到大量释放。本研究结果显示，蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，D-乳酸水平及DAO水平均降低，说明二者联合治疗能够降低脓毒症患者肠道黏膜损害程度。
当机体发生心肌损伤，使得心肌因缺血缺氧导致脂肪酸供能升高，使得心肌细胞内FABP3水平得到释放[20]。同时，由于细胞膜的通透性增加，使得FABP3穿过细胞膜进入到血液，进而在血液中FABP3水平增加。GPBB增加表明机体中出现心肌损伤，其在早期的心肌损伤中就能够由心肌细胞释放进血液中，进而反映出现心肌损伤程度[21]。本研究结果显示，蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，FABP3水平较高、GPBB水平较低，说明二者联合治疗、能够降低脓毒症患者心肌损伤程度。
综上所述，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，能够显著改善患者免疫功能，抑制炎症反应，同时能够降低肠道黏膜损害程度，使FABP3水平升高、GPBB水平降低，从而减轻脓毒症患者心肌损伤程度。
[参考文献]
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（收稿日期：2021-03-12）
[关键词] 蛋白酶抑制剂;脓毒症;连续性肾脏替代疗法;白介素-8;心型脂肪酸结合蛋白;糖原磷酸化酶同工酶BB
[中图分类号] R593.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2021）24-0006-04
Effect of protease inhibitors combined with CRRT on FABP3 and GPBB levels in patients with sepsis
WANG Miaoshu1 SONG Yukang1 SUN Renhua2 YANG Xianghong2
1.Department of Intensive Care Unit， the First People′s Hospital of Wenling City in Zhejiang Province， Wenling 317500， China; 2.Department of Intensive Care Unit， Zhejiang Provincial People′s Hospital， Hangzhou 310014， China
[Abstract] Objective To explore the effect of protease inhibitors combined with continuous renal replacement therapy （CRRT） on heart fatty acid binding protein （FABP3） and glycogen phosphorylase isoenzyme BB （GPBB） levels in patients with sepsis. Methods A total of 134 patients with sepsis admitted to our hospital from February 2019 to June 2020 were selected and divided into the CRRT group and the combined treatment group according to the random number table，with 67 cases in each group. Patients in the CRRT group were treated with CRRT，and patients in the combined treatment group were treated with CRRT combined with protease inhibitors. The levels of CD4+， CD8+ and CD4+/CD8+ were measured and compared by flow cytometry. The levels of interleukin-8 （IL-8）， tumor cytokine-α（TNF-α）， interleukin-6 （IL-6）， fatty acid binding protein 3 （FABP3）， and glycogen phosphorylase isoenzyme BB （GPBB） were measured and compared by enzyme-linked immunosorbent assay.The levels of D-lactate and diamine oxidase （DAO） were measured by immunohistochemistry. The therapeutic efficacy was evaluated in the two groups. Results After treatment，compared with the CRRT group， CD4+ level and CD4+/CD8+ were higher and CD8+ level was lower in the combined treatment group（P<0.05）. Compared with the CRRT group， IL-8，TNF-α and IL-6 levels were lower in the combined treatment group（P<0.05）. D-lactate level and DAO level were lower in the combined treatment group（P<0.05）.Compared ith the CRRT group， the FABP3 level was higher and the GPBB level was lower in the combined treatment group（P<0.05）. The total treatment response rate was higher in the combined treatment group（P<0.05）. Conclusion Protease inhibitors combined with CRRT in the treatment of patients with sepsis can significantly improve the immune function， inhibit the inflammatory response，reduce the degree of intestinal mucosal damage， increase the level of FABP3 and decrease the level of GPBB， thereby reducing the degree of myocardial injury in patients with sepsis. [Key words] Protease inhibitors; Sepsis; Continuous renal replacement therapy; Interleukin-8; Heart-type fatty acid binding protein; Glycogen phosphorylase isoenzyme BB
脓毒症作为全身性的一种由炎症反应介导的疾病，能够由大手术、烧伤、创伤及感染等多种因素所诱发[1]。其特点为病情危重、预后较差等，同时是临床上较为常见的危重疾病[2]。当患者脓毒症较为严重时，常合并有脓毒性休克及机体器官功能障碍，进而增加患者病死率，最高达到70%[3]。相关研究显示，脓毒症主要是由炎症反应增加、胃肠道功能出现障碍及免疫功能出现低下等较多因素所引起[4]。关于脓毒症的治疗具有一定的难度，当患者出现少尿、酸中毒及意识改变等，即为严重脓毒症[5]。有效的抑制炎症反应是治疗脓毒症的关键，乌司他丁作为从人尿中所分离的一种广谱蛋白酶抑制剂，能够有效抑制多种糖类及脂类的水解酶及蛋白酶活性，同时能够抑制促炎因子的过度释放[6]。连续性肾脏替代疗法（Continuous renal replacement therapy，CRRT）能够以超滤、吸附及滤过等多种步骤对炎症因子、有毒物质进行有效清除，对代谢紊乱进行平衡，并稳定内环境，在肾脏疾病中得到广泛治疗。本研究应用蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，并观察其治疗效果，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2019年2月至2020年6月我院收治的脓毒症患者134例，按照随机数字表法分为CRRT组与联合治疗组，每组各67例。CRRT组男36例，女31例，年龄52～63岁，平均（53.5±8.4）岁;联合治疗组男32例，女35例，年龄53～64岁，平均（54.5±6.8）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究所有患者及家属均知情同意，并获得我院医学伦理委员会批准。
纳入标准：全部患者均符合中国医师协会急诊医师分会，中国研究型医院学会对脓毒症的诊断标准[8]。排除标准：①近期进行过免疫抑制剂、激素、抗生素等类型药物治疗者;②合并血液系统及神经系统疾病者;③合并出现慢性疾病终末期及胃肠道恶性肿瘤者;④合并严重心脑血管相关受损者;⑤对本研究所使用药物不耐受或抵抗者;⑥资料不齐全者。
1.2 方法
患者在入院后均根据病因给予常规治疗，其中包括液体复苏、抵抗感染及生命支持。对脏器功能进行保护及对内环境进行纠正等。根据常规基础，CRRT组进行CRRT治疗，应用德国O3血液净化仪进行血液净化，选择分子肝素钙进行抗凝，具体操作为：使用双腔导管将其留置在颈内静脉或股静脉中，建立起血管通道，以进行前稀释与连续性静脉-静脉血液的滤过方法对患者连续治疗24 h，将血流量设置为160～250 mL/min。联合治疗组在CRRT组治疗的基础上增加蛋白酶抑制剂进行治疗，蛋白酶抑制剂选择乌司他丁（广东天普生化公司，国药准字H19990133;规格：20 mg/支）进行治疗，使用10 mL氧化钠注射液对100 000 U乌司他丁进行溶解后，静脉滴注，以每日2次连续应用1周，同时根据病情及症状进行酌量的增减。
1.3 观察指标及评价标准
1.3.1 CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标水平检测 患者均在清晨空腹抽取静脉血3 mL，使用流式细胞仪对CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标水平进行测定。FACSV antage流式细胞仪购自BD公司，由高资历医师进行检测两组患者治疗前及治疗后细胞免疫指标Th1、Th2和Th1/Th2指标变化情况。
1.3.2 酶联免疫法检测IL-8、TNF-α、IL-6、FABP3、GPBB水平 在聚苯乙烯的反应孔内加入50 mm碳酸盐包缓冲液稀释后进行抗原，在加盖处理后，于4℃冰箱内存放24 h，在第2天进行3次洗涤，后抛干，将稀释液（pH值为7.4 0.02 mol/L Tris-HCl缓冲液）稀释的待测标本0.1 mL放入每个孔中，同时放入阳性和阴性对照标本，存放在42℃环境中60 min，移除液体后，进行3次洗涤并抛干，在每个孔中放入IL-6、TNF-α、IL-8及FABP3、GPBB抗体0.1 mL，存放60 min，移除液体后，进行3次洗涤并抛干，在每个孔中放入底物液（0.1 mol/L的Na2HPO4，0.05 mol/L的枸橼酸），混匀之后放入0.1 mL邻苯二胺，进行20 min遮光，再一次放入2 mol/L H2SO4 0.05 mL放置在每个孔内，终止反应。最后使用酶标仪检测A值测定IL-6、TNF-α、IL-8及FABP3、GPBB水平。
1.3.3 免疫組化法检测D-乳酸、DAO水平 以PBS作为阴性对照，当细胞膜或细胞浆呈棕黄色或棕褐色为CK19染色阳性信号。将组织蜡块进行石蜡切块，将厚度切为4 μm，常规脱蜡、脱水，进行抗原修复，除去离子水孵化，并滴加D-乳酸、DAO为一抗，在4℃置放12 h，进行2次PBS清洗，同时滴加聚合酶辅助剂，37℃下水浴，进行持续孵化，时间为20 min;2次PBS清洗，并进行滴加IgG多聚体。在37℃下水浴，进行持续孵化，时间为30 min。后计算出D-乳酸、DAO水平。
1.3.4 疗效标准 参照卢武等[7]研究中疗效评价标准并做出适当改动，对两组治疗效果进行判定，其中显效为患者发热、心动过速及水肿等症状消失，炎症指标、器官障碍参数等恢复正常水平;有效为患者发热、心动过速及水肿等症状得到改善，炎症指标、器官障碍参数等接近正常水平;无效为患者症状及体征未出现好转或出现恶化。总有效率=（有效例数+显效例数）/总例数×100%。 1.4 统计学方法
采用SPSS 21.0统计学软件进行数据分析。计量资料比较进行重复测量数据方差分析，组间两两进行比较以独立t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组治疗前后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标水平比较
治疗前，两组患者CD4+、CD8+、CD4+/CD8+指标水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后，两组患者CD4+指标水平与CD4+/CD8+水平上升，CD8+指标下降，且与CRRT组相比，联合治疗组CD4+指标水平与CD4+/CD8+均较高，CD8+指标水平较低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 两组治疗前后IL-8、TNF-α、IL-6水平比较
治疗前，两组IL-8、TNF-α、IL-6水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后，两组患者IL-8、TNF-α、IL-6水平均有所下降，且與CRRT组相比，联合治疗组IL-8、TNF-α、IL-6水平均较低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。
2.3 两组治疗前后D-乳酸、DAO水平比较
治疗前，两组患者D-乳酸、DAO水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后，两组患者D-乳酸、DAO水平下降，联合治疗组D-乳酸水平及DAO水平均低于CRRT组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。
2.4 两组治疗前后FABP3、GPBB水平比较
治疗前，两组患者FABP3、GPBB水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后，两组患者FABP3水平上升，GPBB水平下降，且与CRRT组相比，联合治疗组FABP3水平较高、GPBB水平较低，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。
2.5 两组疗效比较
联合治疗组总有效率高于CRRT组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表5。
3 讨论
重症脓毒症常伴有脓毒性休克或器官功能衰竭，这也是导致病死率较高的重要原因[9-10]。CRRT是临床常用的治疗脓毒症的重要手段，其具有快捷且有效的特点[11]。能够通过体外循环对炎症介质与内毒素进行连续性清除，有效阻止炎症反应损伤加重及肠黏膜屏障功能障碍，同时对免疫功能起到调节的作用。而乌司他丁作为广谱蛋白酶抑制剂，在稳定白细胞膜与溶解体膜中发挥重要作用，并能够有效抑制促炎因子的释放，减轻炎症反应损伤[12]。
本研究显示，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT治疗的脓毒症患者CD4+、CD4+/CD8+水平上升，CD8+水平下降。脓毒症伴随的免疫抑制是威胁患者预后的主要原因[13]。有研究显示，随着脓毒症发生发展，患者免疫系统出现紊乱，致使感染得不到有效控制，这也是导致病情不断恶化的重要因素[14]。T淋巴细胞的凋亡是导致脓毒症患者免疫功能发生紊乱的主要原因。CD4+、CD8+在正常情况下二者动态为平衡情况下，当CD4+/CD8+比值下降则说明细胞的免疫功能为低下状态[15-16]。本研究显示，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，能够调控T淋巴细胞亚群水平，调节患者细胞免疫功能，改善免疫系统紊乱状况，从而起到提升治疗效果，改善患者预后的作用。
本研究显示，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT治疗的脓毒症患者IL-8、TNF-α、IL-6水平下降。炎症介质在脓毒症发生发展中发挥重要作用，当脓毒症中出现感染，将会激活炎症反应，进而使大量炎症因子得到释放[17-18]。内源性炎症介质在相互作用下，使得对全身系统及器官造成损伤。IL-8、TNF-α、IL-6为广谱的炎症因子，三者水平变化参与机体炎症反应发生发展。本研究结果显示，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，能够抑制炎症反应严重程度，出现这一研究结果的原因可能是蛋白酶抑制剂乌司他丁具有抑制促炎因子释放，减轻炎症反应损伤程度的作用。
D-乳酸在发生全身感染、缺血再灌注及肠道缺血中，其水平得到升高。其主要是由肠道黏膜通透性增高所引起[19]。因此，D-乳酸能够有效反映肠道黏膜损害程度及通透性变化。DAO属于肠道黏膜上层的绒毛中有着高度活性的细胞酶，能够在组胺与多种多胺的代谢中发挥作用。当肠黏膜细胞出现受损，DAO将得到大量释放。本研究结果显示，蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，D-乳酸水平及DAO水平均降低，说明二者联合治疗能够降低脓毒症患者肠道黏膜损害程度。
当机体发生心肌损伤，使得心肌因缺血缺氧导致脂肪酸供能升高，使得心肌细胞内FABP3水平得到释放[20]。同时，由于细胞膜的通透性增加，使得FABP3穿过细胞膜进入到血液，进而在血液中FABP3水平增加。GPBB增加表明机体中出现心肌损伤，其在早期的心肌损伤中就能够由心肌细胞释放进血液中，进而反映出现心肌损伤程度[21]。本研究结果显示，蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，FABP3水平较高、GPBB水平较低，说明二者联合治疗、能够降低脓毒症患者心肌损伤程度。
综上所述，使用蛋白酶抑制剂联合CRRT对脓毒症患者进行治疗，能够显著改善患者免疫功能，抑制炎症反应，同时能够降低肠道黏膜损害程度，使FABP3水平升高、GPBB水平降低，从而减轻脓毒症患者心肌损伤程度。
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（收稿日期：2021-03-12）