【摘 要】
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通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用Sal Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及D
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,中国农业科学院兰州兽医研究所
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);
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通过设计特异引物,扩增获得口蹄疫病毒3ABC编码区的目的基因片段,将其用Sal Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切后,与经同样处理的带有一段信号肽序列的穿梭质粒pMelBac-B连接,经筛选、鉴定及DNA序列分析后,获得重组质粒pMel-3ABC.将重组质粒与线性化的杆状病毒骨架Bac-N-Blue共转染Sf9昆虫细胞,通过噬斑筛选和PCR鉴定,获得了含有目的基因的重组杆状病毒.用重组病毒感染Sf9昆虫细胞,通过间接ELISA 方法,检测细胞培养基上清液中表达的口蹄疫病毒抗原.结果表明,口蹄疫病毒基因片段3ABC正确克隆到杆状病毒载体上,重组病毒可在昆虫细胞中表达目的蛋白.
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