【摘 要】
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目的 克隆幽门螺杆菌趋化相关基因cheA和they并构建其原核表达系统,建立幽门螺杆菌体外趋化模型并确定其趋化诱导物质,了解特异性抗体和氯氰碘柳胺对幽门螺杆菌趋化的抑制作用.方法 PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株全长cheA和cheY基因片段,T-A克隆后测序.构建上述目的基因原核表达系统,采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶成像分析系统检查目的重组蛋白rCheA和rCheY的表达情况
【机 构】
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310058,杭州,浙江大学医学院病原生物学系,310006，杭州市第一人民医院检验科,310006,杭州市第一人民医院检验科,310058,杭州,浙江大学医学院病原生物学系,310006,杭州市第一
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目的 克隆幽门螺杆菌趋化相关基因cheA和they并构建其原核表达系统,建立幽门螺杆菌体外趋化模型并确定其趋化诱导物质,了解特异性抗体和氯氰碘柳胺对幽门螺杆菌趋化的抑制作用.方法 PCR扩增幽门螺杆菌NCTC11637株全长cheA和cheY基因片段,T-A克隆后测序.构建上述目的基因原核表达系统,采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶成像分析系统检查目的重组蛋白rCheA和rCheY的表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rCheA和rCheY.rCheA和rCheY免疫家兔获得抗血清,用饱和硫酸铵沉淀法和DEAE-32离子交换法提纯IsG,用免疫扩散法检测抗血清及其IsG效价.采用硬琼脂法建立幽门螺杆菌NCTC11637株体外趋化模型并检测11种物质的趋化诱导作用,同时分别观察抗rCheA IgG(rCheA-IgG)和氯氰碘柳胺钠对细菌趋化的抑制作用.结果 PCR扩增获得预期大小的cheA和cheY基因片段,其核苷酸和氨基酸序列与文献报道完全相同.所构建的原核表达系统能有效表达rCheA和rGheY.rCheA和rCheY兔抗血清及其IgG免疫扩散效价均分别为1:4和1:2.盐酸、硫酸和乙酸对该幽门螺杆菌均有趋化诱导作用,一定浓度的rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠均对幽门螺杆菌趋化有抑制作用(P<0.05).结论 本研究成功地构建了幽门螺杆菌NCTC11637株cheA和cheY基因原核表达系统.H~+是诱导幽门螺杆菌趋化的信号物质,rCheA-IgG和氯氰碘柳胺钠均能抑制幽门螺杆菌对H~+的趋化。
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