【摘 要】
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目的 观察抗肝癌单链抗体经药剂学改造后对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用是否有所提高.方法 用IPTG诱导原核表达质粒PET32a-Rc-RNase在大肠埃希菌中表达.对包涵体进
【机 构】
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第四军医大学护理系,第四军医大学病理学教研室,沈阳药科大学药学院
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目的 观察抗肝癌单链抗体经药剂学改造后对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721的杀伤作用是否有所提高.方法 用IPTG诱导原核表达质粒PET32a-Rc-RNase在大肠埃希菌中表达.对包涵体进行复性和纯化,并进行Western-blotting检测.在氯仿中加入磷脂(PC)、胆固醇(CHOL)和胆固醇琥珀酰酯(CHS),除氯仿形成千膜,加入RC-RNase蛋白溶液,充分溶解干膜后,超声、过滤及过Sephadex(G-50柱子.测包峰率后加入乙基[3-(二甲胺基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)和氮羟基琥珀酰亚胺磺酸钠(SSNHS),在2-(n-吗啡啉)乙磺酸(MES)缓冲液中反应0.5 h,再加入抗肝癌单链抗体(hdscFv),4℃过夜.用MTT(噻唑蓝)法检测所制备的免疫脂质体、细胞毒素和脂质体对肝癌细胞的杀伤作用.结果 免疫脂质体对肝癌细胞的杀伤效果最好,细胞毒素次之,脂质体最差,其半抑制浓度值(IC50)分别是:3.28μg/ml、22.44μg/ml和98.26μg/ml.结论 经药剂学改造后的抗肝癌单链抗体对体外培养的肝癌细胞杀伤明显提高,为其作为抗肝癌药物的进一步研究打下了基础.
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