【摘 要】
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目的 用纯化的重组刚地弓形虫RH株主要表面抗原 1(SAG1)作为检测抗原 ,建立间接法rSAG1 ELISA ,检测弓形虫IgG抗体并与国外进口试剂盒进行比较 ,以观察其阳性和阴性符合率 ;
【机 构】
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江苏省寄生虫病防治研究所; 宜兴市第一人民医院; 江苏省寄生虫病防治研究所;
【基金项目】
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江苏省寄生虫病重点学科;江苏省寄生虫分子生物学实验室开放课题 (WK2 0 0 2 15 )
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目的 用纯化的重组刚地弓形虫RH株主要表面抗原 1(SAG1)作为检测抗原 ,建立间接法rSAG1 ELISA ,检测弓形虫IgG抗体并与国外进口试剂盒进行比较 ,以观察其阳性和阴性符合率 ;并对rSAG1 ELISA检测的精确度、灵敏度和特异性进行评价。方法 接种重组菌至LB肉汤中 ,IPTG诱导表达后 ,用Ni2 + 螯合柱进行亲和纯化 ;分别用不同浓度的重组抗原rSAG1包被聚苯乙烯酶标条 ,检测不同稀释度的阳性和阴性血清 ,以辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG为二抗 ,采用正交试验确定rSAG1 ELISA的最佳检测条件 ;按rSAG1 ELISA法的最佳检测条件对混合弓形虫IgG阳性和阴性血清重复测 2 0次进行精确度的检测 ;采用抗体抑制试验检测其特异性 ;同时对用进口试剂盒筛得的 5 2份弓形虫IgG阳性血清和 4 0份弓形虫IgG阴性血清进行检测。结果 制备的rSAG1重组蛋白纯度在90 %以上 ;以该重组抗原建立的rSAG1 ELISA的最佳检测条件为 :重组抗原rSAG1的包被浓度为 5 μg/ml,血清稀释度 1∶10 0 ,酶标记的羊抗人IgG 1∶2 0 0 0稀释 ;用rSAG1 ELISA对混合弓形虫IgG阳性和阴性血清的重复检测表明 :IgG阳性血清的检测值的变异系数 (CV值 )为 10 .9% ,IgG阴性血清的CV值为 10 .7% ;灵敏度检测表明血清稀释度在 1∶5 0～ 1∶2 0 0均可检出阳性 ;特异性
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