【摘 要】
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为了研究斜带石斑鱼甘露糖受体(Epinephelus coioides mannose receptor,EcMR)在抗赤点石斑鱼神经坏死病毒(red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)感染中的免疫
【机 构】
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华南师范大学生命科学学院,广东省水产健康安全养殖重点实验室,广东 广州 510631;仲恺农业工程学院动物科技学院,广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心,广州市水产病害与水禽养殖重点实验室,广东
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为了研究斜带石斑鱼甘露糖受体(Epinephelus coioides mannose receptor,EcMR)在抗赤点石斑鱼神经坏死病毒(red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)感染中的免疫功能,实验成功克隆与表达了EcMR.结果显示,EcMR cDNA全长4793 bp,共编码1446个氨基酸.EcMR的蛋白结构域包括1个信号肽(signal peptide)、1个富含蓖麻类β型三叶草结构域(RICIN)、1个Ⅱ型纤维连接蛋白结构域(FNⅡ)、8个串联的C-型凝集素样结构域(CLECTs)以及1个跨膜结构域(transmembrane region).实时定量PCR(qRT-PCR)和细胞免疫荧光(IF)分析结果显示,EcMR在斜带石斑鱼的8个组织中均有表达,其mRNA的相对表达量顺序为鳃>头肾>脑>脾脏>肝脏>外周血>心脏>肌肉.在研究EcMR是否参与RGNNV入侵过程中时发现,RGNNV可以在GF-1细胞系中快速增殖,同时显著激活EcMR的表达.为进一步探究RGNNV对GF-1细胞系的影响,本实验通过双染色法检测了RGNNV感染GF-1细胞系后的细胞凋亡情况,研究表明,RGNNV感染可以促进GF-1细胞系的凋亡,并且细胞凋亡率随着RGNNV感染时间延长而增加.同时,qRT-PCR和酶活性检测结果显示,RGNNV的感染可以显著促进凋亡相关基因的转录水平以及Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶活性水平.综上所述,本研究成功克隆了EcMR,并揭示了其在RGNNV入侵过程中一定的相关性.本研究结果将为石斑鱼病毒性疾病的防控提供参考.
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