【摘 要】
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微囊藻毒素LR（MC-LR）分子量小于1 000 u,为半抗原,需要与载体蛋白偶联后才能刺激免疫应答用于抗体制备。本研究利用碳二亚胺法将MC-LR分别与钥孔血蓝蛋白（KLH）和牛血清白蛋白（BSA）
【机 构】
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安徽科技学院; 江苏省食品质量安全重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(编号:31701724);安徽省家禽产业技术体系基金(编号:AHCYTX-10);江苏省社会发展项目(编号:BE2017706);江苏省农业科技自主创新资金[编号:CX(15)1016]
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微囊藻毒素LR（MC-LR）分子量小于1 000 u,为半抗原,需要与载体蛋白偶联后才能刺激免疫应答用于抗体制备。本研究利用碳二亚胺法将MC-LR分别与钥孔血蓝蛋白（KLH）和牛血清白蛋白（BSA）进行偶联,获得免疫抗原（MC-KLH）和包被抗原（MC-BSA）。采用紫外扫描光谱、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）等3种方法对2种人工抗原进行鉴定,并对小鼠进行免疫。用间接非竞争酶联免疫吸附测定法（ELISA）和竞争ELISA测定了抗血清效价和敏感度。结果表明,紫外扫描光谱法可观察到2种人工抗原的紫外吸收谱与载体蛋白相比发生改变。通过SDS-PAGE法可以观察到MC-BSA分子量比BSA增大。另外质谱法测定的MC-BSA的相对分子量为76 515.84,计算得到的MC-LR与BSA的偶联比为10∶1。MC-KLH免疫小鼠后,抗血清效价最高达到1∶32 000倍,MC-LR对鼠多抗血清的抑制中浓度(I50)为0.53μg/mL。成功合成了MC-LR的免疫原和包被原为其单克隆抗体的制备奠定了基础。还比较了3种鉴定方法的适用性和优缺点,为其他人工抗原的鉴定方法提供了有益的参考。
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