【摘 要】
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目的:探讨盐酸石蒜碱(LH)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和周期的影响及其机制.方法:体外培养TPC-1细胞,用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L)的LH处理TPC-1细胞48 h,CCK-8法检测LH作用TPC-1细胞的IC50.参照IC50,将对数生长期TPC-1细胞随机分为7组:空白对照(control)组、溶剂对照(DMSO)组、1μmol/L LH组、2μmol/L LH组、4μmol/L LH组、NAC(3 mmol/L)组和LH(4μmol/
【机 构】
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江苏大学医学院,江苏镇江212013
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目的:探讨盐酸石蒜碱(LH)对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和周期的影响及其机制.方法:体外培养TPC-1细胞,用不同浓度(1.25、2.5、5、10、20、40、60、80和100μmol/L)的LH处理TPC-1细胞48 h,CCK-8法检测LH作用TPC-1细胞的IC50.参照IC50,将对数生长期TPC-1细胞随机分为7组:空白对照(control)组、溶剂对照(DMSO)组、1μmol/L LH组、2μmol/L LH组、4μmol/L LH组、NAC(3 mmol/L)组和LH(4μmol/L)+NAC(3 mmol/L)组.用CCK-8法、平板集落、EdU实验检测LH对细胞增殖的影响;透射电子显微镜观察细胞线粒体超微结构;流式细胞术检测细胞周期、活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位变化;Western blot法检测MAPK家族蛋白(p38 MAPK、ERK1/2、JNK、p-p38 MAPK、p-ERK1/2和p-JNK)的水平;免疫荧光检测p-p38 MAPK、p-JNK和p-ERK1/2在细胞内的定位.结果:(1)LH抑制TPC-1细胞增殖,抑制率与LH浓度及作用时间呈正比,LH作用48 h的IC50为2.314μmol/L;(2)4μmol/L LH处理后TPC-1细胞线粒体超微结构发生变化,LH呈浓度依赖性地使线粒体膜电位去极化(P<0.05);(3)LH处理后TPC-1细胞S期比例显著升高,G0/G1期比例显著降低(P<0.05);(4)LH处理后的TPC-1细胞ROS水平相较对照组显著升高(P<0.01);(5)LH处理后TPC-1细胞p38 MAPK、ERK1/2、JNK、p-p38 MAPK、p-ERK1/2和p-JNK蛋白水平均显著升高,尤以磷酸化蛋白升高显著,具有一定的药物浓度依赖性,且p-p38 MAPK和p-ERK1/2在TPC-1细胞中都出现不同程度的入核现象;(6)NAC能抑制部分MAPK通路的激活.结论:LH在体外能抑制TPC-1细胞的增殖,诱导细胞线粒体超微结构受损、线粒体膜电位去极化、细胞S期阻滞和细胞ROS水平升高,其作用机制可能是通过ROS累积诱导激活部分MAPK通路而发挥作用.
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