【摘 要】
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目的:探讨LRRK2在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药的作用和分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测了48例乳腺癌组织及其配对正常组织中LRRK2表达;并检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A、乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、BT-483及阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR中LRRK2 mRNA与蛋白表达水平.通过转染si-LRRK2序列干扰LRRK2表达,采用CCK-8实验和流式细胞仪分别检测敲降LRRK2对MCF-7、MCF
【机 构】
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郑州大学附属洛阳中心医院甲状腺乳腺外科,河南 洛阳 471000
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目的:探讨LRRK2在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药的作用和分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测了48例乳腺癌组织及其配对正常组织中LRRK2表达;并检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A、乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、BT-483及阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR中LRRK2 mRNA与蛋白表达水平.通过转染si-LRRK2序列干扰LRRK2表达,采用CCK-8实验和流式细胞仪分别检测敲降LRRK2对MCF-7、MCF-7/ADR细胞增殖活力、耐药IC50值及细胞凋亡的影响;采用Wstern blot检测细胞凋亡相关蛋白、耐药蛋白及TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达.结果:乳腺癌组织和细胞中LRRK2表达显著高于癌旁正常组织和正常乳腺上皮细胞(P<0.01).与空白对照control组和阴性对照siRNA组相比,si-LRRK2组MCF-7、MCF-7/ADR细胞增殖活力显著抑制,细胞凋亡率及凋亡相关蛋白caspase-3、Bax表达显著升高、Bcl-2表达显著降低(P<0.01);si-LRRK2组MCF-7/ADR细胞IC50值及耐药蛋白P-gp表达明显降低(P<0.01),MCF-7/ADR细胞化疗敏感性显著提高.si-LRRK2组TLR4/NF-κB通路相关蛋白TLR4、NF-κB p65及p-IKKβ、p-IκB磷酸化水平明显降低(P<0.01),炎症小体NLRP3表达也显著降低(P<0.01).si-LRRK2组细胞共转染pcDNA3.1-TLR4或pcDNA3.1-NLRP3后,敲降LRRK2对MCF-7/ADR细胞增殖、耐药的抑制作用及促凋亡作用被显著逆转(P<0.05).结论:LRRK2在乳腺癌组织及细胞中显著高表达,敲降LRRK2能够抑制乳腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,提高耐药细胞化疗敏感性;LRRK2可能通过调控TLR4/NF-κB信号通路、调节NLRP3炎症小体,进而调控P-gp表达,激活NLRP3介导的炎症途径,参与乳腺癌细胞的生物学行为,延缓细胞耐药.
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