【摘 要】
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为克隆水稻灌浆期耐热性相关基因的全长c DNA序列,本研究以水稻灌浆期耐热纯系XN0437T和热敏感纯系XN0437S为材料,于灌浆初期(扬花后第8天)进行38.0/33.0±0.5℃(白天/夜间)
【机 构】
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江西农业大学/作物生理生态与遗传育种教育部重点实验室/南京粮油作物协同创新中心,江西省红壤研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31160272);江西省自然科学基金项目(2010GQN0804);江西省青年科学基金重点项目(20133ACB21004)
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为克隆水稻灌浆期耐热性相关基因的全长c DNA序列,本研究以水稻灌浆期耐热纯系XN0437T和热敏感纯系XN0437S为材料,于灌浆初期(扬花后第8天)进行38.0/33.0±0.5℃(白天/夜间)温度处理,设3次高温处理重复;高温处理结束时,取耐热和热敏感纯系籽粒提取总RNA,3次高温处理样品的总RNA等量混合后,利用SMART技术合成c DNA双链,经琼脂糖凝胶电泳分离后,分5个区段回收大小不同的c DNA,分别克隆到p GEM-T Easy Vector载体,构建了5个全长c DNA亚文库并分析了这些亚文库的质量。结果表明:5个全长c DNA亚文库共获得7 974个阳性克隆,平均插入片段大于1.0kb,整个文库的全长率约为75%;插入片段大于0.5 kb的亚克隆文库的滴度均大于4.6×106pfu·m L-1、重组率大于98.1%±0.79%。为获得全长c DNA文库克隆目的基因的全长奠定了基础。
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