【摘 要】
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目的 探讨Bim在黑色素瘤细胞内质网应激状态下可能存在的异常调控,及其在黑色素瘤细胞对内质网应激耐受中的作用.方法 用衣霉素诱导黑色素瘤细胞Mel-RM和MM200,产生内质网应
【机 构】
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安徽医科大学免疫学教研室,中国科学技术大学生命科学学院肿瘤分子生物学实验室,Immunology and Oncology Unit
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目的 探讨Bim在黑色素瘤细胞内质网应激状态下可能存在的异常调控,及其在黑色素瘤细胞对内质网应激耐受中的作用.方法 用衣霉素诱导黑色素瘤细胞Mel-RM和MM200,产生内质网应激模型.采用流式细胞仪Annexin Ⅴ/PI双染法及Hoechst染色法检测细胞凋亡;Western blot检测caspase-3和caspase-9的活化,以及Bim、GRP78、CHOP及Foxo1等的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测Bim、CHOP及Foxo1的mRNA水平.以小干扰RNA(siRNA)特异性沉默人胚肾上皮细胞系HEK293的Bim基因,观察Bim的蛋白表达和细胞凋亡情况.结果 衣霉素作用后,黑色素瘤细胞对内质网应激诱导的凋亡表现为耐受,HEK293细胞中caspase-3和caspase-9明显活化,但在黑色素瘤细胞中却不明显.3 μmol/L衣霉素作用黑色素瘤Mel-RM和MM200细胞12、24、36 h后,Bim蛋白的水平均未上调,mRNA表达的变化倍率分别为0.37±0.05、0.13±0.02、0.02±0.01和0.41±0.06、0.16±0.04、0.21±0.03,与HEK293细胞相比,均发生下调(P＜0.01).在HEK293细胞中,特异性沉默Bim基因后,caspase-3的活化程度下降,Bim siRNA干扰组细胞凋亡率为(5.69±0.38)%,明显低于siRNA阴性对照组[(40.32±1.64)%,P
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