【摘 要】
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目的:建立小鼠诺如病毒(MNV)的间接免疫荧光试验(IFA)的检测方法.
方法:将MNV-1接种RAW264.7细胞,培养36小时收集病毒培养物及未感染细胞培养物,点制抗原玻片;以107TCID5
【机 构】
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中国医学科学院医学实验动物研究所,北京协和医学院比较医学中心,北京,100021
【出 处】
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2014第十一届中国实验动物科学年会
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目的:建立小鼠诺如病毒(MNV)的间接免疫荧光试验(IFA)的检测方法.
方法:将MNV-1接种RAW264.7细胞,培养36小时收集病毒培养物及未感染细胞培养物,点制抗原玻片;以107TCID50的MNV-1灌胃接种BALB/c小鼠,收集感染血清做阳性对照血清.收集人工感染后不同时间点的血清样品,以1∶10的稀释度使用IFA法测定感染血清MNV抗体滴度.选取80份送检小鼠血清样品,以IFA和ELISA方法测定,差异样品使用Western blot方法进行验证.
结果:MNV-1感染RAW264.7细胞(36 ～48)h,细胞感染率为60％,以36 h感染细胞状态为佳;IFA法测定感染小鼠血清,小鼠感染1周后抗体水平逐濒提高,在4周时抗体滴度达到最高值,之后维持稳定,采集感染4周的动物血清做IFA方法的阳性质控品;80份血清中,IFA法测定阳性27份,阴性53份,ELISA法测定阳性32份,阴性48份;Western blot方法对差异样品验证,其中阳性3份,阴性2份,IFA法和ELISA法检测符合率分别为96.0％和97.5％.
结论:IFA方法检测小鼠诺如病毒基本可以反应小鼠的感染情况,偶有假阴性的出现,可以选择IFA方法和ELISA方法作为初筛,差异样品用Western blot方法验证.
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