摘 要 报道梦驼铃片中褪黑素含量测定的双波长分光光度法，以278nm为测定波长，300.4nm为参比波长，平均加样回收率为99.96%，RSD=0.68%（n=5）。
　　关键词 双波长分光光度法 褪黑素
　　
　　褪黑素具有改善睡眠，调节人体内分泌平衡之功效。本文根据梦驼铃片的处方特点，采用双波长分光光度法测定其中褪黑素的含量，操作简便快捷，结果准确可靠。
　　
　　仪器与试剂
　　
　　HP8453型紫外分光光度计，褪黑素对照品（由德国进口），维生素B6（含量99.99%），冰醋酸为分析纯，梦驼铃片由本院药房提供。
　　
　　实验方法及方法学考察
　　
　　溶液的配制：①褪黑素对照品的配制：精密称取褪黑素对照品1.0mg 于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀。②维生素B6的配制：按处方中与褪黑素的比例精密称取维生素B₆适量于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀。③辅料溶液的配制：按处方精密称取缺褪黑素和维生素B₆的辅料约0.1g于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液适量振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀后过滤。④样品溶液的配制：取梦驼铃片20片，研匀，精密称取0.1g于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤。
　　紫外吸收光谱的绘制及测定波长的选择：将各溶液分别在200～400nm波长处扫描，以2mol/L冰醋酸溶液为空白，褪黑素在278nm处有最大吸收。维生素B6在278nm、300.4nm 处为等吸收波长，辅料溶液在278nm、300.4nm 处为一直线，几乎无吸收，不影响测定，经用褪黑素对照液和维生素B₆溶液精选确定278nm为测定波长，300.4nm为参比波长，以OA=A₂₇₈-A₃₀₀为定量信息测定褪黑素的含量，光谱图见图1。
　　


　　线性关系：精密称取褪黑素对照品10mg于50ml量瓶中，加2mol/L冰醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，分别在278nm、300.4nm处测定吸收度，计算△A值，求回归方程：△A=6.303C-0.7721，γ=1.0000，n=5。结果表明：褪黑素在0.008～0.04mg/ml范围内浓度与吸收度差呈良好线性关系。
　　稳定性实验：取样品溶液，每隔半小时于278nm、300.4nm处测吸收值，计算△A值，连续测定6小时，结果△A值保持穩定，RSD=0.61%。
　　重复性实验：取同一批梦驼铃片分别制成5份样品溶液，依“样品测定”项下方法分别测定褪黑素的含量，结果RSD=0.81%。
　　加样回收实验：精密称取已知褪黑素含量的梦驼铃片细粉50mg共5份，分别精密加入褪黑素对照品0.4～0.6mg，制成样品溶液，依“样品测定”项下方法处理，测定，结果平均加样回收率为99.96%，RSD=0.68%。
　　
　　样品测定
　　
　　取褪黑素对照液与样品溶液分别在278nm、300.4nm处测定吸收度，以2mol/L冰醋酸溶液为空白，计算△A值及褪黑素含量，结果见表1。
　　


　　
　　小结
　　
　　采用双波长分光光度法测定梦驼铃片中褪黑素的含量，结果线性关系、稳定性、重复性均良好，为该品种的含量测定提供了又一个可靠的方法。