【摘 要】
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目的:通过在小鼠1-细胞期受精卵内过表达Pkmyt1-wild type(WT)(野生型)mRNAs,研究蛋白激酶Pkmyt1对小鼠受精卵早期发育的影响,为进一步阐明Pkmyt1对哺乳动物受精卵早期发育调
【机 构】
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辽宁医学院基础医学院发育生物学教研室,辽宁医学院基础医学院生物化学与分子生物学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金资助课题(81270698,31371173,81401199)
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目的:通过在小鼠1-细胞期受精卵内过表达Pkmyt1-wild type(WT)(野生型)mRNAs,研究蛋白激酶Pkmyt1对小鼠受精卵早期发育的影响,为进一步阐明Pkmyt1对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制奠定基础。方法:构建pcDNA3.1/myc-Pkmyt1-WT质粒。超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组和Pkmyt1-WT mRNAs注射组,收集各组卵细胞后采用Western blotting法检测Pkmyt1蛋白表达和Cdc2-pTyr15磷酸化状态;相差显微镜观察受精卵的形态变化并计数卵裂率。结果:pcDNA3.1/myc-Pkmyt1-WT质粒构建成功。与未注射组(0.414±0.016)和TE缓冲液注射组(0.441±0.013)比较,受精卵显微注射Pkmyt1-WT mRNAs 4h后,Pkmyt1蛋白表达水平(1.112±0.025)增高(P<0.01)。与未注射组(60.81%±3.27%)和TE缓冲液注射组(61.79%±4.08%)比较,Pkmyt1-WT-mRNA注射组卵裂率(34.2%±3.25%)显著降低(P<0.01)。Pkmyt1-WT mRNA注射组在注射hCG后29.0h检测到微弱的磷酸化信号,29.5h检测不到任何磷酸化信号。结论:Pkmyt1过表达后磷酸化Cdc2-pTyr15可抑制小鼠1-细胞期受精卵的卵裂率,提示Pkmyt1负调控小鼠受精卵有丝分裂的进程。
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