【摘 要】
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本研究旨在获得具有天然构象和活性良好的禽呼肠孤病毒(ARV)dB和σC蛋白,采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中共表达dB和σC蛋白,并对其活性进行鉴定.根据NCBI数据库中ARV dB和
【机 构】
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广西壮族自治区兽医研究所,广西兽医生物技术重点实验室,南宁530001
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本研究旨在获得具有天然构象和活性良好的禽呼肠孤病毒(ARV)dB和σC蛋白,采用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中共表达dB和σC蛋白,并对其活性进行鉴定.根据NCBI数据库中ARV dB和σC基因序列设计引物,将两个基因克隆至pFast-Dual载体,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭杆粒.通过转染sf9细胞,筛选到含有σB和σC基因的重组病毒.将重组病毒感染sf9细胞,通过优化接毒量和收获时间等参数,确定最佳表达条件,在sf9细胞中高效共表达σB和σC蛋白.Western blotting和间接免疫荧光(IFA)检测结果表明,成功在sf9细胞中共表达了ARV σB和σC蛋白,并具有很好的生物学活性.本试验结果为开发鉴别诊断试剂以及ARV颗粒疫苗的研究奠定了基础.
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