目的 以小鼠脾脏淋巴细胞为例,探讨科研工作中多聚甲醛固定时间对流式细胞术检测小鼠脾脏淋巴细胞亚群百分比及平均荧光强度的影响,为科研中准确检测表面抗原提供依据.方法 获取小鼠脾脏淋巴细胞,分别以CD3-异硫氰酸荧光素(FITC)、CD4-藻红蛋白(PE)标记淋巴细胞,样本制备完成后用2%多聚甲醛固定,利用流式细胞术检测CD3+、CD4+细胞的百分比及平均荧光强度,并分别在0 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h记录数据,比较以上时间点CD3+、CD4+细胞的百分比及平均荧光强度是否有差异.结果 样本经2%多聚甲醛固定后,CD3+、CD4+细胞的百分比及平均荧光强度与样本制备完成立即上机检测相比均逐渐降低,其中24 h之后各个时间点CD3+、CD4+细胞的平均荧光强度与0 h相比,具有明显的差异,具有统计学意义(P0.05).结论 细胞群体中抗原表达百分比受固定时间影响较小,尤其是高表达抗原如CD3、CD4等分子;抗原表达的平均荧光强度更易受固定时间的影响.样本制备完成后,尽早上机检测,是获取准确数据的最优选择,不能立即上机检测的应使用2%多聚甲醛固定后4℃保存24 h内上机检测,仍然可以得到较为真实可靠的数据.对于需要多时间点收集的强抗原检测,可以考虑制样后1w内检测,其阳性细胞表达率仍然可信.