基于CRISPR/Cas9系统的HEK293T细胞DMD基因第51号外显子的靶向敲除

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【摘要】

：

目的应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,完成HEK293T细胞中DMD基因第51号外显子（exon51）高效的靶向敲除。方法设计靶向人DMD基因exon51 5＇端及3＇端的sgRNA并克隆至CRISPR/Cas9载体质粒

【作者】

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李双马珊珊崔思颖屈素真蔡奥捷关方霞孔祥东

【机构】

：

郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心,郑州大学生命科学学院

【出处】

：

基础医学与临床

【发表日期】

：

2018年3期

【关键词】

：

CRISPR/Cas9 DMD基因单载体质粒 HEK293T细胞外显子敲除 CRISPR/Cas9 DMD gene single vector pla

【基金项目】

：

2016年度河南省产学研合作项目（162107000017）

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目的应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,完成HEK293T细胞中DMD基因第51号外显子（exon51）高效的靶向敲除。方法设计靶向人DMD基因exon51 5＇端及3＇端的sgRNA并克隆至CRISPR/Cas9载体质粒PX459中,转染至HEK293T细胞后,提取基因组DNA并使用Surveyor法检测切割活性;使用目标外显子两端切割活性最高的sgRNA构建PX459-2sgRNA质粒,转染至HEK293T细胞后用PCR及T载体测序检测靶向外显子切除情况。结果50%的HEK293T细胞中DMD基因

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