【摘 要】
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目的:研究同源结构域相互作用蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein kinases 2,HIPK2)基因重组质粒对HCT-116细胞环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)及β-catenin表达
【机 构】
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上海市徐汇区大华医院普外科,上海中医药大学附属曙光医院肿瘤科,上海市中医医院肿瘤科
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目,Nos.81303103,81303106;上海市科委基金资助项目,Nos.13140902500,13ZR1462200;上海市教委创新基金资助项目,Nos.12ZZ118,12YZ058;上海市卫生局基金资助项目,Nos.2010161,2011ZJ030,20124048;上海市徐汇区医学科研基金资助项目,No.SHXH201004~~
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目的:研究同源结构域相互作用蛋白激酶2(homeodomain-interacting protein kinases 2,HIPK2)基因重组质粒对HCT-116细胞环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)及β-catenin表达的影响,探讨HIPK2基因对人结直肠癌细胞血管新生因子表达的调节作用.方法:采用脂质体将pEGFP-N3和pEGFP-N3-HIPK2质粒转染人结直肠癌细胞,分为正常组、载体质粒组和HIPK2质粒组,ELISA法检测细胞培养液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,Western blot检测β-catenin蛋白表达情况.在上述3组细胞中同时转染含COX-2基因启动子质粒pGL3-basic-COX-2后,双荧光素酶活性检测COX-2启动子的表达,Real-time PCR检测COX-2 mRNA的表达水平.结果:HCT-116细胞中pEGFP-N3-HIPK2质粒组的荧光表达量与载体质粒pEGFP-N3组的表达量基本一致,两组相比无明显差异.转染pEGFP-N3-HIPK2质粒后,HCT-116细胞内VEGF的表达量由对照组的857.54p g/m L±65.04 p g/m L降低至368.32 p g/m L±98.82 pg/mL,两组相比具有统计学意义(P<0.05);COX-2启动子活性由空载体组的266.407×10-5±40.902×10-5下降至75.467×10-5±18.666×10-5,两组相比具有统计学意义(P<0.05);COX-2 mRNA的相对表达量由空载体组的3.48×10-4±0.64×10-4下调至1.07×10-4±0.32×10-4,两组相比具有统计学意义(P<0.05).同时,Western blot结果显示,HIPK2可明显降低细胞β-catenin的蛋白表达,上调细胞内p-β-catenin蛋白的表达量.结论:pEGFP-N3-HIPK2可明显上调HCT-116细胞HIPK2的表达,显著下调人结直肠癌细胞COX-2的转录表达及VEGF的表达水平,其作用机制可能与其抑制细胞COX-2及β-catenin表达,调节β-catenin-COX-2信号转导有关.
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