【摘 要】
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目的:表达纯化重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)58型E2蛋白,制备多克隆抗体。方法:构建重组质粒p ET-28b-E2,转化至BL21(DE3)p Lys S中诱导表达,包涵体洗涤后经镍
【机 构】
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复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海市工业菌株工程技术研究中心,上海市计划生育科学研究所国家人口和计划生育委员会重点实验室,
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目的:表达纯化重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)58型E2蛋白,制备多克隆抗体。方法:构建重组质粒p ET-28b-E2,转化至BL21(DE3)p Lys S中诱导表达,包涵体洗涤后经镍柱亲和层析分离得到纯化目的蛋白。用纯化的重组E2蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗HPV58型E2蛋白多克隆抗体,ELISA分析多克隆抗体的效价,免疫印迹检测抗体的特异性。结果:表达纯化了重组HPV58型E2蛋白,制备了高滴度和高特异性的多克隆抗体。结论:制备的多克隆抗体可用于对HPV58型E2蛋白进行精细B细胞线性表位鉴定。
Objective: To express purified recombinant human papillomavirus (HPV) type 58 E2 protein and prepare polyclonal antibody. Methods: The recombinant plasmid p ET-28b-E2 was constructed and transformed into BL21 (DE3) p Lys S to induce its expression. The inclusion body was washed and separated by nickel column affinity chromatography to obtain the purified target protein. Rabbit anti-HPV58 E2 protein polyclonal antibody was prepared by immunizing New Zealand white rabbits with purified recombinant E2 protein. The titer of the polyclonal antibody was analyzed by ELISA. The specificity of the antibody was detected by immunoblotting. Results: The recombinant HPV58 E2 protein was expressed and purified, and polyclonal antibodies with high titer and high specificity were prepared. Conclusion: The prepared polyclonal antibody can be used to identify the fine B cell linear epitope of HPV58 E2 protein.
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