【摘 要】
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目的 建立一种环介导恒温扩增(LAMP)结合纳米生物传感器(LFB)快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的快速方法,为临床检测提供依据.方法 针对类鼻疽伯克霍尔德菌的Ⅲ型分泌系统基因设计LAMP特异性引物,建立LAMP方法,通过纳米生物传感判断结果,并应用临床样本对该方法进行评价.结果 LAMP-LFB检测的最佳扩增条件为67℃反应40 min,对类鼻疽伯克霍尔德菌纯培养物DNA灵敏度达到100 fg,对258株菌株进行检测,包括227株类鼻疽伯克霍尔德菌和31株非类鼻疽伯克霍尔德菌,特异性为100％.应用于46个
【机 构】
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首都儿科研究所实验中心,北京100020;三亚市人民医院中心实验室和检验科,海南三亚572000
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目的 建立一种环介导恒温扩增(LAMP)结合纳米生物传感器(LFB)快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的快速方法,为临床检测提供依据.方法 针对类鼻疽伯克霍尔德菌的Ⅲ型分泌系统基因设计LAMP特异性引物,建立LAMP方法,通过纳米生物传感判断结果,并应用临床样本对该方法进行评价.结果 LAMP-LFB检测的最佳扩增条件为67℃反应40 min,对类鼻疽伯克霍尔德菌纯培养物DNA灵敏度达到100 fg,对258株菌株进行检测,包括227株类鼻疽伯克霍尔德菌和31株非类鼻疽伯克霍尔德菌,特异性为100％.应用于46个临床样本检测时,与传统分离培养方法相比,达到100％的诊断准确率.LAMP-LFB整个检测过程可在1h内完成,包括15 min DNA制备,40 min LAMP扩增,2 min的LFB结果判读.结论 本研究建立的LAMP-LFB技术是一种快速、灵敏、特异的检测类鼻疽伯克霍尔德菌的方法,可作为类鼻疽基础、现场和临床实验室诊断的潜在工具.
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