论文部分内容阅读
目的肝细胞生长因子通过其受体c-met的激活,在调节肿瘤侵袭、转移和血管形成中具有重要作用.NK4不仅是肝细胞生长因子的拮抗剂,而且也是血管形成的抑制剂,阻断HGF/c-met途径和肿瘤血管的形成可成为抗胰腺癌治疗的策略之一.为此,构建NK4基因真核细胞表达载体并进行转染研究,探讨NK4基因在胰腺癌细胞中的表达及其生物学活性.方法对重组pcDNA3/hNK4质粒转行酶切,将NK4基因克隆到真核表达载体pRC/CMV2,应用脂质体将重组pRC/CMV2-hNK4质粒转入胰腺癌SW1990细胞中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Western blot)分别检测转染肿瘤细胞中NK4 mRNA和蛋白的表达,并筛选出高转录和高表达的细胞克隆.以MTT法检测其细胞克隆表达产物对血管内皮细胞增殖的影响.结果转导NK4基因的SW1990细胞可表达并分泌NK4,RT-PCR扩增出预期的453 bp片段,Western blot显示有50 000的NK4蛋白,其上清液可显著抑制血管内皮细胞的生长(0.537±0.106和1.152±0.128,0.736±0.108和1.161±0.110,P＜0.01).结论NK4基因对血管内皮细胞的生长具有抑制作用,在肿瘤基因治疗中可能具有重要意义.