【摘 要】
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目的 探讨RNA干扰特异性沉默Bcl-xl基因后对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增殖及凋亡相关因子Bcl-xl、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)表达的影响.方法 采用组织块胶原酶消化法进行人RA关节滑膜细胞原代培养及传代,利用基因库提供的Bcl-xl cDNA序列构建靶向Bcl-xl基因的siRNA质粒,同时合成一个错义序列作为阴性对照.LipofectamineTM 20
【机 构】
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121001锦州,辽宁医学院附属第一医院风湿免疫科,121001锦州,辽宁医学院附属第一医院风湿免疫科,121001锦州,辽宁医学院附属第一医院风湿免疫科,121001锦州,辽宁医学院附属第一医院风湿
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目的 探讨RNA干扰特异性沉默Bcl-xl基因后对类风湿关节炎(RA)滑膜细胞增殖及凋亡相关因子Bcl-xl、Bax、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3)表达的影响.方法 采用组织块胶原酶消化法进行人RA关节滑膜细胞原代培养及传代,利用基因库提供的Bcl-xl cDNA序列构建靶向Bcl-xl基因的siRNA质粒,同时合成一个错义序列作为阴性对照.LipofectamineTM 2000转染滑膜细胞,分别于转染后24、48、72 h应用四甲基偶氧唑蓝(MTT)法评价RNA干扰沉默Bcl-xl后对滑膜细胞增殖的影响；应用蛋白印迹法观察转染后不同时间滑膜细胞凋亡相关因子Bcl-xl、Bax、Caspase-3的蛋白表达情况.多样本均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t或Tamhane's T2检验对结果进行统计.结果 MTT实验发现RNA干扰特异性沉默Bcl-xl后可明显抑制滑膜细胞增殖,其中在转染后48 h时其抑制作用最强,随着时间的延长这种抑制作用逐渐减弱,但与空白对照组及阴性对照组比较仍差异有统计学意义(P＜0.05)；蛋白印迹法检测结果显示与空白及阴性对照组相比siRNA转染后Bcl-xl蛋白表达明显下降(P＜0.01),其中在转染后48 h时表达最少,与之相反Bax,Caspase-3蛋白表达则在转染后明显增加.结论 RNA干扰特异性沉默Bcl-xl可以明显下调RA滑膜细胞抗凋亡因子Bcl-xl的表达,活化Caspase-3蛋白,从而对抑制滑膜细胞的过度增殖发挥重要作用。
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