【摘 要】
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目的 通过观察慢病毒介导的Ⅰ型胶原((COL Ⅰ)短发夹(sh)RNA感染大鼠系膜细胞后其增殖、凋亡及细胞周期的变化,探索未来应用于动物实验,甚至临床时RNA干涉(RNAi)药物对靶细胞
【机 构】
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海军总医院重症医学科,海军总医院肾内科
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目的 通过观察慢病毒介导的Ⅰ型胶原((COL Ⅰ)短发夹(sh)RNA感染大鼠系膜细胞后其增殖、凋亡及细胞周期的变化,探索未来应用于动物实验,甚至临床时RNA干涉(RNAi)药物对靶细胞生长行为的影响.方法 利用感染增强剂(对照组)、空慢病毒载体及感染增强剂(pSC-GFP组)、COL Ⅰ shRNA慢病毒表达载体及感染增强剂(pSC-GFP/COL Ⅰ组)分别感染大鼠系膜细胞,用噻唑蓝法检测细胞增殖,利用Annexin V/PE法检测细胞凋亡,利用流式细胞仪检测细胞周期,进而观察慢病毒表达载体对细胞上述能力的影响.结果 pSC-GFP/COL Ⅰ组和pSC-GFP组均能显著抑制细胞增殖,且慢病毒表达载体抑制能力又显著高于空病毒,分别于感染后24 h、48 h和72 h计算抑制效率为22.52%、28.57、33.33%.凋亡实验结果表明,慢病毒感染细胞后一定程度诱导了细胞凋亡,但作为载体携带的COL Ⅰ shRNA未引起进一步的细胞凋亡加剧.细胞周期实验发现慢病毒引起细胞周期阻滞于G2/M期.而在72 h COL Ⅰ shRNA对S期的阻滞逐渐突出.结论 慢病毒介导Ⅰ型胶原短发夹RNA转染大鼠系膜细胞后,在一定程度上影响了细胞生长行为,但总体来说仍是安全的,为进一步动物实验及药物研制奠定基础.
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