Beclin 1基因过表达对人乳腺癌细胞BT-549裸鼠皮下成瘤生长影响研究

来源 :中华肿瘤防治杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zjzjzj13
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目的人乳腺癌BT549细胞缺失自噬基因Beclin 1是一种抑癌基因,过表达Beclin 1诱导自噬可抑制肿瘤的形成和发展。本研究预通过重组慢病毒载体转染Beclin 1基因,以观察过表达Beclin 1对裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤生长情况的影响。方法以重组慢病毒载体pLenO-GTP-Beclin 1感染BT549细胞为实验组(6只),以对照慢病毒颗粒(pLenO-GTP-Vecto)感染BT549细胞为阴性对照组(6只),不做处理BT549细胞(缺失Beclin 1基因)为空白对照组(6只)。3组转染细胞分别接种至裸鼠皮下,构建人乳腺癌BT549细胞裸鼠皮下成瘤模型。观察记录裸鼠成瘤情况并绘制肿瘤生长曲线。裸鼠饲养28d后脱臼法处理,剥离瘤体,测定肿瘤体积和质量。用RT-PCR法、蛋白质印迹法及免疫组化法检测皮下成瘤中Beclin 1基因表达情况。结果慢病毒载体构建成功,裸鼠接种各组细胞后在第7天均有肿瘤形成,实验组的瘤体平均体积为(79.66±42.52)mm3,肿瘤生长速度明显慢于阴性对照组的(358.62±58.83)mm3和空白对照组的(400.40±121.45)mm3,差异有统计学意义,F=27.34,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均重量分别为(0.16±0.06)、(0.81±0.32)和(0.93±0.37)g,差异有统计学意义,F=12.749,P<0.05。RT-PCR法检测显示,实验组Beclin 1 mRNA的相对表达量为31.11±12.77,明显高于阴性对照组的0.66±0.02和空白组的1.00±0.07,差异有统计学意义,F=16.86,P<0.05;实验组Beclin 1蛋白表达量为0.212±0.078,明显高于阴性对照组的0.044±0.006和空白对照组的0.043±0.009,差异有统计学意义,F=27.418,P<0.05。实验组中Beclin 1蛋白的阳性表达率为46.7%,明显高于阴性对照组的10.0%和空白对照组的16.7%,差异有统计学意义,χ2=12.34,P<0.01。结论 Beclin 1基因过表达能够明显抑制裸鼠人乳腺癌BT549细胞皮下成瘤的生长,Beclin 1的表达量与肿瘤成长呈负相关。
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