【摘 要】
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目的 探索一种高通量定量检测细胞自噬小体数量的方法.方法 将绿色荧光蛋白-轻链蛋白3(GFP-LC3)转基因小鼠的角质形成细胞分为对照组(不接受照射或饥饿处理)、饥饿组(给予饥
【机 构】
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100034 北京大学第一医院皮肤性病科浙江省人民医院整形外科,310000杭州;奥地利维也纳医科大学;清华大学附属北京清华长庚医院皮肤科;
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目的 探索一种高通量定量检测细胞自噬小体数量的方法.方法 将绿色荧光蛋白-轻链蛋白3(GFP-LC3)转基因小鼠的角质形成细胞分为对照组(不接受照射或饥饿处理)、饥饿组(给予饥饿处理)、20 J/cm2长波紫外线(UVA)照射组和40 J/cm2 UVA照射组.处理后6h,将细胞固定后在共聚焦显微镜下采集图片.用ImageJ软件编辑宏指令对细胞内GFP-LC3绿色荧光点及细胞进行自动计数,并比较不同组间自噬水平.结果 利用ImageJ软件编辑的宏指令可以成功识别并计数荧光图片中的自噬小体.在测试计算机上分析一张420万像素的图片仅需不到0.6 s.饥饿组、20 J/cm2UVA照射组和40 J/cm2 UVA照射组平均自噬小体数量高于对照组,未加胃抑素A时各组间比较,F=5.01,P＜ 0.05;加入胃抑素A时各组间比较,F=20.05,P＜0.05.该方法可以成功区分饥饿组、UVA照射组和对照组的自噬水平差异.结论 成功为自噬研究提供了一种新的高通量定量检测方法,该方法能够快速准确地检测细胞自噬荧光点.
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