【摘 要】
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目的 利用慢病毒载体将胸苷磷酸化酶(TP)基因转染人结肠癌细胞株LOVO,然后应用干扰素-α2a(INF-α2a)处理转染前后细胞,分别测定5-脱氧氟尿苷(5-DFUR)和5-氟尿嘧啶(5-FU)对LO
【机 构】
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510260,广州医科大学附属第二医院胃肠外科;510260,广州医科大学附属第二医院外科实验室;
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目的 利用慢病毒载体将胸苷磷酸化酶(TP)基因转染人结肠癌细胞株LOVO,然后应用干扰素-α2a(INF-α2a)处理转染前后细胞,分别测定5-脱氧氟尿苷(5-DFUR)和5-氟尿嘧啶(5-FU)对LOVO抗肿瘤效应的影响.方法 构建包含TP基因的慢病毒载体,转染结肠癌细胞株LOVO,以流式细胞技术和免疫荧光法检测在第5代LOVO中的转染效率;加INF-α2a培养24h后分别应用RT-PCR和Wester blot检测细胞的TP mRNA和TP蛋白表达;MTS法检测5-DFUR和5-FU对各组细胞的半数抑制浓度(IC50);高效液相色谱法检测各组细胞转化5-DFUR为5-FU的量.结果 转染TP基因的效率达95％.LOVO+INF-α2a组的TP mRNA表达是LOVO组的1.87倍,而LOVO-TP组和LOVO-TP+ INF-α2a组TPmRNA表达则比LOVO组分别增加了18.56倍和59.61倍(P＜0.01).LOVO-TP+ INF-α2a组和LOVO-TP组蛋白表达水平比LOVO组分别增加242.23倍和197.69倍(P＜0.01).5-DFUR对LOVO-TP组细胞的IC50值仅为LOVO组细胞的37.2％,而LOVO-TP+INF-α2a组的IC50则是LOVO组的18.2％.LOVO-TP组在加入100、200、400 μmol/L5-DFUR的培养基中检测的5-FU浓度比LOVO组分别增高了26.13％、33.23％、32.95％,而LOVO-TP+ INF-α2a组比LOVO组分别增高了49.94％、61.66％、72.14％. 结论 转染TP eDNA能够明显提高LOVO细胞的TP mRNA及TP蛋白的表达水平,而INF-α2a则进一步增强这种上调作用.增高的TP表达使细胞外5-DFUR转化为5-FU含量增加,明显提高5-DFUR的细胞毒性.
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