血小板生成素在毕赤酵母中的表达

来源 :山东大学学报：理学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：lity1021

【摘要】

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以人胎肝cDNA文库为模板，用PCR和DNA重组技术，将TPO cDNA克隆到pGEM -T载体并测序，再将目的片段亚克隆到分泌型表达载体上获得重组质粒pPIC9K/TPO，并通过PCR引物设计、扩增和DNA

【作者】

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邢振兰张红卫郭树华林泉吴祖泽

【机构】

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山东大学生命科学院发育生物学研究所,中国军事医学科学院放射医学研究所

【出处】

：

山东大学学报：理学版

【发表日期】

：

2001年1期

【关键词】

：

血小板生成素毕赤酵母基因重组诱导表达 thrombopoietin Pichia pastoris gene recombination inducibl

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以人胎肝cDNA文库为模板，用PCR和DNA重组技术，将TPO cDNA克隆到pGEM -T载体并测序，再将目的片段亚克隆到分泌型表达载体上获得重组质粒pPIC9K/TPO，并通过PCR引物设计、扩增和DNA连接使毕赤酵母α-因子的信号肽序列取代TPO固有的信号肽序列，使之与毕赤酵母的α-交配因子(MFα)融合，该表达载体受AOX1强启动子的调控.经电转化和G418筛选获重组酵母KM71/pPIC9K/TPO，并用甲醇进行诱导表达.经甲醇诱导后，酵母重组子可高效分泌表达TPO.经SDS-PAGE和West

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