液相色谱质谱对重组人生长激素-Fc(CHO细胞)二硫键连接的确认

来源 :中国生物制品学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:information1005
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的 利用液相色谱质谱(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)对重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)-Fc二硫键连接进行确认.方法 液相色谱条件为色谱柱:CSHC18(2.1 mm×100 mm,130 (A),1.7μm);流动相A:100%水(含0.1%甲酸);流动相B:100%乙腈(含0.1%甲酸);流速:0.3 mL/min;柱温:65C;上样量:5μL,梯度洗脱.质谱条件:MSE采集模式;毛细管电压:2500 V;Cone电压:40V;去溶剂气体温度:350℃;源温:120℃;去溶剂气体流速:600 L/h;一级质谱扫描范围:100~2000 m/z.样品用8 mol/L盐酸胍于50℃变性30 min、1 mol/L碘乙酰胺室温烷基化0.5h,离心置换成50 mmol/L NH4CO3(pH 8.0)缓冲液后,用胰酶(w/w,1∶15)37 ℃酶解4h,利用LC-MS对酶解的肽段进行采集和分析.结果 确认rhGH-Fc二硫键连接为Cys53-Cys165,Cys182-Cys189,1∶Cys210-2∶Cys210,1∶Cys213-2∶Cys213,Cys245-Cys305,Cys351-Cys409,与理论连接一致.结论 建立了稳定的LC-MS方法分析rhGH-Fc的二硫键连接,可用于rhGH-Fc的常规分析.
其他文献
摘 要:文章概述了预应力碳纤维板加固技术,并以某桥梁工程为例,探析了外部粘贴预应力碳纤维板技术在桥梁结构加固工程中的实践应用,旨在为类似桥梁工程的维护和施工人员提供一定的参考。  关键词:预应力碳纤维板技术;桥梁结构;应用  中图分类号:TU757 文献标识码:A 文章编号:1006-8937(2016)29-0158-02  1 概 述  碳纤维板具有非常强的耐腐蚀性能,并且已经成为现代建筑行业
期刊
摘 要:随着河北省经济社会的发展,高职院校图书馆的发展也面临着新的机遇和挑战——知识与信息传播手段不断更新,图书馆的各项业务朝着网络化、数字化的方向发展,读者信息需求呈现多样化、个性化、多层次的特征。高职图书馆的发展,取决于建设一支具有献身精神、创新意识、研究能力、服务热情的专业人才队伍。而建设专业人才队伍,关键在于以人为本,建立图书馆人才激励机制。应从丰富激励方式、完善绩效考核体系、营造良好的组
期刊
摘 要:文章探讨了钢筋混凝土反力墙关键工序的施工改进技术,首先简单介绍了反力墙的作用,随后介绍了本次研究的工程概况,之后制定出详细的施工方案,分析了常规施工方法以及改进施工方法,最后确定施工方法。再之后,根据确定的施工方法对工程施工关键环节施工技术进行详细分析。  关键词:钢筋混凝土;反力墙;关键工序;施工改进技术  中图分类号: 文献标识码:A 文章编号:1006-8937(2016)29-01
期刊
流行性乙型脑炎(简称乙脑)是由乙脑病毒引起的一种人类神经系统疾病,预防乙脑的有效手段是接种疫苗.本文对SA14-14-2株乙脑减毒活疫苗在中国和其他亚洲地区的应用现状、安全性及发展趋势作一概述.
摘 要:作为政策评估的初始阶段,公共政策事前评估在整个政策评估中具有不可替代的地位。基于文献分析法,本研究从形式、事实、价值三个维度构建了我国公共政策事前评估指标体系,为我国的公共政策评估体系夯实了理论基础。  关键词:公共政策;事前评估;指标体系  中图分类号:D631.43 文献标识码:A 文章编号:1006-8937(2016)29-0156-02  1 引 言  美国著名行政管理学家J·A
期刊
基于复变函数方法,通过构造保角映射和解析延拓,研究了不可渗透型边界条件下热电材料中具有共线不对称裂纹的圆形孔口问题;给出了电场、温度场和应力场的精确解,获得了复应力函数φ(z)和ψ(z)的解析解;根据Cauchy积分公式求解了共线裂纹的强度因子.数值算例讨论了电流密度强度因子和应力强度因子随孔口半径和裂纹长度变化的情形.结果 表明:电流密度强度因子和应力强度因子都随着圆形孔口半径的增大而增大;当圆形孔口半径一定时,随着裂纹长度比的减小而减小.
铜绿假单胞菌是院内感染常见的条件致病菌之一,其感染严重威胁人类公共健康.铜绿假单胞菌复杂的耐药机制使得临床抗生素治疗变得非常困难,需要寻找新的治疗方法.近年来,组分苗[如脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、胞外多糖(extracellular polysaccharide,EPS)、鞭毛等]、亚单位疫苗[如外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)]、全菌体灭活疫苗、减毒活疫苗等铜绿假单胞菌疫苗已开展研究.有多个疫苗产品进入临床研究阶段,截至目前为止,尚无批准的铜
目的 应用细胞工厂代替转瓶,培养原代地鼠肾细胞制备森林脑炎灭活疫苗,建立连续培养多次收获工艺,以提高疫苗产量.方法 采用40层细胞工厂培养地鼠肾细胞,确定最佳细胞培养条件.用森林脑炎病毒森“张”株感染细胞,连续收获病毒液,经超滤浓缩、灭活、柱层析纯化后获得疫苗原液,按照《中国药典》三部(2015版)进行相关检测.结果 确定了细胞工厂制备森林脑炎灭活疫苗的工艺参数:细胞工厂最适细胞接种量为3~4对地鼠肾/层;感染病毒96 h后第1次收获,之后每48 h收获1次,可连续收获3~5次.原液中抗原含量、蛋白质含量
目的 探讨mTOR信号通路在Omega-3多不饱和脂肪酸饮食干预四氯化碳(CC14)诱导小鼠肝纤维化进程中的作用及其机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照组,4周模型组,8周模型组及治疗组,对照组经腹腔注射玉米油;模型组及治疗组经腹腔注射含20% CCl4的玉米油溶液,5 mL/kg,每周2次,除4周模型组注射4周外,其余3组持续注射8周;治疗组在造模的同时,从第4周开始进行二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)/二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,
目的 建立轮状病毒(rotavirus,RV)微滴数字PCR(RT-ddPCR)检测方法,并进行优化及验证,同时与实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法进行比较.方法 根据NSP5基因保守序列特征,筛选引物和探针,建立RV的RT-ddPCR检测方法,并优化退火温度(55.1、56.0、57.2、58.1、58.9、59.9、61.0、62.1、63.2、64.1、64.9℃)、引物浓度(40、60、100、120 nmol/L)及探针浓度(60、70、80、90、100 nmol/L),同时验证方法的特异