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摘要 本文建立了气相色谱法测定食用调和油中功能性成分角鲨烯的检测方法。样品经氢氧化钾-乙醇溶液皂化，再经正己烷萃取净化、气相色谱法分析测定、内标法定量。结果表明，线性良好，相关系数为0.999 8，测得方法检出限为0.95 mg/kg；在40、80、100 mg/kg的加标水平下，角鲨烯在食用调和油中的平均回收率为96.29%～97.33%，变异系数为1.18%～1.32%，方法分析时间短，重现性好，灵敏度高，可用于食用调和油中功能性成分角鲨烯含量的测定。
关键词 食用调和油；角鲨烯；含量测定；皂化；萃取；气相色谱法
中图分类号 TS277 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）03-0249-02
角鲨烯是一种脂质不皂化物，是最初从角鲨鱼肝脏中发现的多不饱和烯烴。其是由6个六戊二烯组成的二萜，也是一种高度不饱和的直链三萜类非极性化合物，其化学结构为2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯。角鲨烯的生理功能显著，具有强抗氧化作用[1-4]。角鲨烯具有很强的输氧能力，可增强细胞的活力及抗病力，在医学上对心脏病、糖尿病、关节炎、肝炎及胃炎等均有疗效[5]。此外，角鲨烯对防止癌细胞扩散、促进癌细胞失活和加速衰老有重要作用[6]。角鲨烯广泛存在于动植物体内，在动物中尤以深海鱼类（特别是鲨鱼）肝脏中含量最为丰富，含量为15%～69%[7-8]，植物中以苋菜籽油含量最多[9]。
本研究采用氢氧化钾-乙醇溶液皂化、正己烷进行萃取洗净、气相色谱（GC-FID）法进行检测，该方法重现性好，回收率高，可以快速对食用调和油进行检测。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
1.1.1 原料与试剂。食用调和油由中粮东海粮油生产，将非转基因豆油、非转基因菜籽油、非转基因玉米油、花生油、葵花籽油、芝麻油、亚麻籽油按照一定比例调配而成；角鲨烷标准品（纯度≥98%）；角鲨烯标准品（纯度≥98%）。
1.1.2 仪器设备。Agilent 7890A气相色谱（GC-FID）；Labor-ota 4001旋转蒸发仪；QYN 100-1氮吹仪。
1.1.3 标准溶液配制。①角鲨烷内标溶液。准确称取25 mg（精确至0.000 1 g）角鲨烷标准品于25 mL容量瓶中，加入少量正己烷，使其充分溶解后，用正己烷定容至刻度，摇匀，配成1 mg/mL角鲨烷内标溶液。②角鲨烯标准储备溶液。准确称取50 mg（精确至0.000 1 g）角鲨烯标准品于50 mL容量瓶中，加入少量正己烷，使其充分溶解后，用正己烷定容至刻度，摇匀，配成1 mg/mL角鲨烯标准储备液。③含30 μg/mL角鲨烷内标的角鲨烯工作液。将角鲨烯标准储备液用正己烷稀释至浓度分别为2.5、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 μg/mL的标准工作液，并在工作液中加入适量的角鲨烷内标溶液，保证每个工作液中角鲨烷浓度为30 μg/mL。
1.2 试验方法
1.2.1 样品处理。①称量。准确吸取300 μL角鲨烷内标溶液于250 mL圆底烧瓶中，在氮吹仪上吹干后，准确称取0.2～2.0 g食用调和油样品（精确至0.000 1 g）于此烧瓶中。②皂化。于圆底烧瓶中加入50 mL氢氧化钾-乙醇溶液后，将烧瓶与回流冷凝管连接好，在80 ℃恒温水浴锅中皂化回流50 min，停止加热，从回流管顶部加入50 mL水，取出烧瓶摇匀，冷却至室温。③提取。将烧瓶中的皂化液转移至250 mL分液漏斗中，用50 mL正己烷分3次洗涤烧瓶，并将洗涤液倒入分液漏斗中，用力摇动分液漏斗2 min，倒转分液漏斗，小心打开旋塞，间歇地释放压力，静置分层，将下层皂化液转移至另一个250 mL分液漏斗中，再用相同的方法分别用30、20 mL正己烷对皂化液提取2次，将3次正己烷提取液置于同一分液漏斗中。④洗涤。用25 mL乙醇溶液洗涤正己烷提取液3～4次，每次弃去下层的乙醇水溶液，用pH试纸检验直至下层流出液呈中性。⑤浓缩。将洗至中性的正己烷提取液经过铺有约5 g无水硫酸钠的滤纸滤入与旋转蒸发仪配套的球形蒸发瓶中，再用约20 mL的正己烷冲洗3次分液漏斗及无水硫酸钠，并入蒸发瓶中，在40 ℃水浴中旋转蒸发溶剂，待瓶中剩下约2 mL正己烷时，取下蒸发瓶，立即放入氮吹仪中吹干，最后用正己烷溶解并定容至10 mL，过0.45 μm有机滤膜，待测。
1.2.2 色谱条件。进样量为1 μL，峰面积外标法定量。载气为高纯氮气，纯度99.999%；恒压为110.32 kPa；分流比为1∶10；进样口温度为250 ℃；柱温采用程序升温方式，以15 ℃/min的速率从160 ℃升温到220 ℃，保持2 min，然后以5 ℃/min的速率升温到280 ℃，保持20 min，最后以5 ℃/min的速率升温到300 ℃，保持2 min。FID检测器：温度300 ℃，氢气流速40 mL/min，空气流速450 mL/min，尾吹气流速30 mL/min。
2 结果与分析
2.1 标准曲线及限量
用1 mg/mL角鲨烯标准储备液配制成系列标准工作液，按上述色谱条件，进行定量。得出线性方程Y=18.956X-1.583，相关系数R=0.999 8，测得方法检出限为0.95 mg/kg。
2.2 方法精密度及回收率
由表1可知，检测结果平均值为132.23 mg/kg，变异系数为1.42%；由表2可知，在40、80、100 mg/kg的加标水平下，角鲨烯在食用调和油中的平均回收率分别为96.88%、96.29%、97.33%，变异系数分别为1.32%、1.29%、1.18%。
3 结论与讨论 本文采用将食用调和油样品进行皂化，经正己烷萃取净化，用气相色谱法进行角鲨烯含量的定量检测。线性良好，相关系数为0.999 8，测得方法检出限为0.95 mg/kg。在40、80、100 mg/kg的加标水平下，角鲨烯在食用调和油中的平均回收率为96.29%～97.33%，变异系数为1.18%～1.32%，检测过程时间短，重现性好，定量准确，可实现对食用调和油样品中角鲨烯的快速检测。
由于调和油样品在前处理萃取过程中易发生乳化现象，导致液液分離效果不佳，可加少许无水乙醇进行消除。各类调和油脂产品中角鲨烯含量不等，在样品前处理时可视具体样品按方法调整称样量[10]。
4 参考文献
[1] 赵振东，孙震.化学及生物学方法合成角鲨烯研究现状[J].林产化学与工业，2003，23（4）：95-98.
[2] BREENE W M.Food uses of grain amaranth[J].Cereal Foods World，1991，36（5）：426-429.
[3] BARNETT W A，GEWEKE J，SHELL K.Economic complexity：chaos，sunspots，bubbles，and nonlinearity.Proceedings of the Fourth International Symposium in Economic Theory and Econometrics[M].UK：Cambridge University Press，1989.
[4] 赵炎成.“八宝”合一：角鲨烯的食疗保健功能[J].东方食疗与保健，2006（11）：6-7.
[5] 赵振东.松节油合成生物活性角鲨烯反应路线的研究[J].林产化学与工业，2005（增刊1）：20-24.
[6] RAO C V，NEWMARK H L，REDDY B S.Chemopreventive effect of squ-alene on colon cancer[J].Carcinogenesis，1998，19（2）：287.
[7] DEPREZ P P，VOLKMAN J K ，DAVENPORT S R.Squalene content and neutral lipid composition of livers from deepsea sharks caught in Tasma-nian waters[J].Aust J Mar Freshw ater Res，1990，41（3）：375-387.
[8] BAKES M J，NICOLS P D.Lipid，fatty acid and squalene composition of l-iver oil from six species of deep-sea sharks collected in southern au-stralian waters[J].Comparative Biochemistry
关键词 食用调和油；角鲨烯；含量测定；皂化；萃取；气相色谱法
中图分类号 TS277 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）03-0249-02
角鲨烯是一种脂质不皂化物，是最初从角鲨鱼肝脏中发现的多不饱和烯烴。其是由6个六戊二烯组成的二萜，也是一种高度不饱和的直链三萜类非极性化合物，其化学结构为2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18，22-二十四碳六烯。角鲨烯的生理功能显著，具有强抗氧化作用[1-4]。角鲨烯具有很强的输氧能力，可增强细胞的活力及抗病力，在医学上对心脏病、糖尿病、关节炎、肝炎及胃炎等均有疗效[5]。此外，角鲨烯对防止癌细胞扩散、促进癌细胞失活和加速衰老有重要作用[6]。角鲨烯广泛存在于动植物体内，在动物中尤以深海鱼类（特别是鲨鱼）肝脏中含量最为丰富，含量为15%～69%[7-8]，植物中以苋菜籽油含量最多[9]。
本研究采用氢氧化钾-乙醇溶液皂化、正己烷进行萃取洗净、气相色谱（GC-FID）法进行检测，该方法重现性好，回收率高，可以快速对食用调和油进行检测。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
1.1.1 原料与试剂。食用调和油由中粮东海粮油生产，将非转基因豆油、非转基因菜籽油、非转基因玉米油、花生油、葵花籽油、芝麻油、亚麻籽油按照一定比例调配而成；角鲨烷标准品（纯度≥98%）；角鲨烯标准品（纯度≥98%）。
1.1.2 仪器设备。Agilent 7890A气相色谱（GC-FID）；Labor-ota 4001旋转蒸发仪；QYN 100-1氮吹仪。
1.1.3 标准溶液配制。①角鲨烷内标溶液。准确称取25 mg（精确至0.000 1 g）角鲨烷标准品于25 mL容量瓶中，加入少量正己烷，使其充分溶解后，用正己烷定容至刻度，摇匀，配成1 mg/mL角鲨烷内标溶液。②角鲨烯标准储备溶液。准确称取50 mg（精确至0.000 1 g）角鲨烯标准品于50 mL容量瓶中，加入少量正己烷，使其充分溶解后，用正己烷定容至刻度，摇匀，配成1 mg/mL角鲨烯标准储备液。③含30 μg/mL角鲨烷内标的角鲨烯工作液。将角鲨烯标准储备液用正己烷稀释至浓度分别为2.5、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0 μg/mL的标准工作液，并在工作液中加入适量的角鲨烷内标溶液，保证每个工作液中角鲨烷浓度为30 μg/mL。
1.2 试验方法
1.2.1 样品处理。①称量。准确吸取300 μL角鲨烷内标溶液于250 mL圆底烧瓶中，在氮吹仪上吹干后，准确称取0.2～2.0 g食用调和油样品（精确至0.000 1 g）于此烧瓶中。②皂化。于圆底烧瓶中加入50 mL氢氧化钾-乙醇溶液后，将烧瓶与回流冷凝管连接好，在80 ℃恒温水浴锅中皂化回流50 min，停止加热，从回流管顶部加入50 mL水，取出烧瓶摇匀，冷却至室温。③提取。将烧瓶中的皂化液转移至250 mL分液漏斗中，用50 mL正己烷分3次洗涤烧瓶，并将洗涤液倒入分液漏斗中，用力摇动分液漏斗2 min，倒转分液漏斗，小心打开旋塞，间歇地释放压力，静置分层，将下层皂化液转移至另一个250 mL分液漏斗中，再用相同的方法分别用30、20 mL正己烷对皂化液提取2次，将3次正己烷提取液置于同一分液漏斗中。④洗涤。用25 mL乙醇溶液洗涤正己烷提取液3～4次，每次弃去下层的乙醇水溶液，用pH试纸检验直至下层流出液呈中性。⑤浓缩。将洗至中性的正己烷提取液经过铺有约5 g无水硫酸钠的滤纸滤入与旋转蒸发仪配套的球形蒸发瓶中，再用约20 mL的正己烷冲洗3次分液漏斗及无水硫酸钠，并入蒸发瓶中，在40 ℃水浴中旋转蒸发溶剂，待瓶中剩下约2 mL正己烷时，取下蒸发瓶，立即放入氮吹仪中吹干，最后用正己烷溶解并定容至10 mL，过0.45 μm有机滤膜，待测。
1.2.2 色谱条件。进样量为1 μL，峰面积外标法定量。载气为高纯氮气，纯度99.999%；恒压为110.32 kPa；分流比为1∶10；进样口温度为250 ℃；柱温采用程序升温方式，以15 ℃/min的速率从160 ℃升温到220 ℃，保持2 min，然后以5 ℃/min的速率升温到280 ℃，保持20 min，最后以5 ℃/min的速率升温到300 ℃，保持2 min。FID检测器：温度300 ℃，氢气流速40 mL/min，空气流速450 mL/min，尾吹气流速30 mL/min。
2 结果与分析
2.1 标准曲线及限量
用1 mg/mL角鲨烯标准储备液配制成系列标准工作液，按上述色谱条件，进行定量。得出线性方程Y=18.956X-1.583，相关系数R=0.999 8，测得方法检出限为0.95 mg/kg。
2.2 方法精密度及回收率
由表1可知，检测结果平均值为132.23 mg/kg，变异系数为1.42%；由表2可知，在40、80、100 mg/kg的加标水平下，角鲨烯在食用调和油中的平均回收率分别为96.88%、96.29%、97.33%，变异系数分别为1.32%、1.29%、1.18%。
3 结论与讨论 本文采用将食用调和油样品进行皂化，经正己烷萃取净化，用气相色谱法进行角鲨烯含量的定量检测。线性良好，相关系数为0.999 8，测得方法检出限为0.95 mg/kg。在40、80、100 mg/kg的加标水平下，角鲨烯在食用调和油中的平均回收率为96.29%～97.33%，变异系数为1.18%～1.32%，检测过程时间短，重现性好，定量准确，可实现对食用调和油样品中角鲨烯的快速检测。
由于调和油样品在前处理萃取过程中易发生乳化现象，导致液液分離效果不佳，可加少许无水乙醇进行消除。各类调和油脂产品中角鲨烯含量不等，在样品前处理时可视具体样品按方法调整称样量[10]。
4 参考文献
[1] 赵振东，孙震.化学及生物学方法合成角鲨烯研究现状[J].林产化学与工业，2003，23（4）：95-98.
[2] BREENE W M.Food uses of grain amaranth[J].Cereal Foods World，1991，36（5）：426-429.
[3] BARNETT W A，GEWEKE J，SHELL K.Economic complexity：chaos，sunspots，bubbles，and nonlinearity.Proceedings of the Fourth International Symposium in Economic Theory and Econometrics[M].UK：Cambridge University Press，1989.
[4] 赵炎成.“八宝”合一：角鲨烯的食疗保健功能[J].东方食疗与保健，2006（11）：6-7.
[5] 赵振东.松节油合成生物活性角鲨烯反应路线的研究[J].林产化学与工业，2005（增刊1）：20-24.
[6] RAO C V，NEWMARK H L，REDDY B S.Chemopreventive effect of squ-alene on colon cancer[J].Carcinogenesis，1998，19（2）：287.
[7] DEPREZ P P，VOLKMAN J K ，DAVENPORT S R.Squalene content and neutral lipid composition of livers from deepsea sharks caught in Tasma-nian waters[J].Aust J Mar Freshw ater Res，1990，41（3）：375-387.
[8] BAKES M J，NICOLS P D.Lipid，fatty acid and squalene composition of l-iver oil from six species of deep-sea sharks collected in southern au-stralian waters[J].Comparative Biochemistry