【摘 要】
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目的 观察RNA干扰(RNAi)技术抑制上皮细胞黏附分子(EP-CAM)的表达后对胆囊癌GBC-SD细胞增殖、凋亡的影响.方法 针对EP-CAM基因的不同位点构建4个微小RNA(miRNA)重组质粒,转染
【基金项目】
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安徽高等学校省级自然科学研究项目;
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目的 观察RNA干扰(RNAi)技术抑制上皮细胞黏附分子(EP-CAM)的表达后对胆囊癌GBC-SD细胞增殖、凋亡的影响.方法 针对EP-CAM基因的不同位点构建4个微小RNA(miRNA)重组质粒,转染GBC-SD细胞,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测转染48 h后EP-CAM mRNA及蛋白的表达水平,选用干扰效率最强的质粒再转染GBC-SD细胞,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果 4个miRNA重组质粒构建成功;RT-PCR显示干扰质粒-1、-2、-3、-4组EP-CAM mRNA的表达量分别为0.26±0.02、0.79±0.03、0.37±0.02、0.45±0.04均低于空白对照组0.94±0.03及阴性对照组0.92±0.03(P＜0.01);Western blot显示,干扰质粒-1、-2、-3、-4组EP-CAM蛋白的表达量分别为0.22±0.03、0.71±0.03、0.32±0.02、0.41±0.04均低于空白对照组0.85±0.03及阴性对照组0.84±0.04(P＜0.01);选用效果最佳的干扰质粒-1转染GBC-SD细胞后,MTY法显示干扰组细胞增殖活性受到抑制,转染48 h后最显著,抑制率为39%,流式细胞仪检测显示3组细胞的凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 针对EP-CAM的miRNA重组质粒能特异地抑制EP-CAM基因表达,抑制GBC-SD细胞的增殖.
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