【摘 要】
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目的·研究伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导肝细胞损伤过程中全细胞蛋白质的磷酸化修饰水平的变化规律.方法·将小鼠肝细胞株AML12与ConA(10μg/mL)共培养,诱导肝细
【机 构】
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上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部研究工程中心,上海200240;上海交通大学分析测试中心,上海200240
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目的·研究伴刀豆球蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导肝细胞损伤过程中全细胞蛋白质的磷酸化修饰水平的变化规律.方法·将小鼠肝细胞株AML12与ConA(10μg/mL)共培养,诱导肝细胞损伤模型,12 h后提取细胞的总蛋白,经消化酶解后富集肽段,并使用高效液相-质谱联用分析仪进行检测.采用非标定量法对磷酸化位点和肽段进行鉴定与相对定量分析.筛选出单位点磷酸化修饰水平差异达到2倍以上的蛋白进行生物学功能富集分析和蛋白互作调控网络分析.结果·在ConA诱导的AML12细胞损伤模型中,共鉴定到磷酸化修饰肽段11200条,可定位定量的肽段2685条.其中差异性调控的磷酸化修饰肽段82条,对应77个蛋白.这77个磷酸化蛋白主要与蛋白质结合、酶活动等相关,且主要通路与细胞凋亡以及RAS激酶通路相关.结论·AML12细胞在ConA诱导的肝细胞损伤过程中发生了磷酸化修饰变化,差异磷酸化修饰的蛋白可能与肝细胞凋亡相关.
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