【摘 要】
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目的:观察针对TGF-βRⅡ的干扰RNA对TGF-βRⅡ表达的抑制作用,探讨RNA干扰TGF-βRII的方法对肾间质纤维化的抑制作用。方法:PCR方法扩增TGF-βRⅡ的cDNA序列,将全长的TGF-βR
【机 构】
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第四军医大学唐都医院肾脏内科,第四军医大学预防医学系,
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目的:观察针对TGF-βRⅡ的干扰RNA对TGF-βRⅡ表达的抑制作用,探讨RNA干扰TGF-βRII的方法对肾间质纤维化的抑制作用。方法:PCR方法扩增TGF-βRⅡ的cDNA序列,将全长的TGF-βRⅡcDNA插入pcDNA3中,构建TGF-βRⅡ的真核表达载体,酶切、测序及间接免疫荧光鉴定;根据TGF-βRⅡ的设计针对TGF-βRⅡ的干扰RNA,构建针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒pSUPER-TGF-βRⅡ并进行酶切及测序鉴定;脂质体介导针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒和TGF-βRII的真核表达载体共转染293T细胞,western-blot检测293细胞内TGF-βRⅡ的表达。结果:pcDNA3-TGF-βRⅡ测序结果显示TGF-βRⅡ基因未发生突变。间接免疫荧光检测TGF-βRⅡ在293T细胞内的表达;测序显示RNA干扰质粒pSUPER-TGF-βRⅡ序列正确,RNA干扰质粒明显抑制293T细胞内TGF-βRⅡ的表达。结论:成功构建了TGF-βRⅡ的真核表达载体及针对TGF-βRⅡ的RNA干扰质粒,RNA干扰质粒能够抑制TGF-βRⅡ的表达,为进一步研究针对TGF-βRⅡ的RNA干扰对肾纤维化的预防及治疗作用提供有用工具。
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