【摘 要】
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目的 建立一种快速、特异、灵敏、准确定量的单核细胞增生(单增)李斯特菌(Listeriamonocytogenes)与志贺菌(Shigella)同步检测方法.方法 分别根据单增李斯特菌溶血素O基因hly与志贺菌侵袭性质粒抗原H基因ipaH设计合成引物和探针.构建重组质粒pGEM-T-hly与pGEM-T-ipaH,并以EcoR I单酶切使环状重组质粒线性化作为标准品.优化反应体系,分析特异性.双重
【机 构】
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310018,杭州,中国计量学院生命科学学院,310018,杭州,中国计量学院生命科学学院,310018,杭州,中国计量学院生命科学学院,河南省疾病预防控制中心
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目的 建立一种快速、特异、灵敏、准确定量的单核细胞增生(单增)李斯特菌(Listeriamonocytogenes)与志贺菌(Shigella)同步检测方法.方法 分别根据单增李斯特菌溶血素O基因hly与志贺菌侵袭性质粒抗原H基因ipaH设计合成引物和探针.构建重组质粒pGEM-T-hly与pGEM-T-ipaH,并以EcoR I单酶切使环状重组质粒线性化作为标准品.优化反应体系,分析特异性.双重荧光定量PCR对人工污染的脱脂灭菌乳进行检测.结果 成功构建了重组质粒标准品,并运用5'、3'端分别标记FAM、TAMRA的hly基因探针和5'、3'端分别标记HEX、TAMRA的ipaH基因探针成功建立了单增李斯特菌与志贺菌同步荧光定量PCR检测方法.结论 建立的方法有较强的特异性,线性范围好(105～101copies/μl,R2≥0.998),灵敏度为10 copies/PCR,同步检测人工污染脱脂灭菌乳的灵敏度为102CFU/ml。
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