【摘 要】
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目的:原核表达人降钙素原(procalcitonin,PCT)重组蛋白,制备高纯度的PCT单克隆抗体。方法:将构建的PCT-pET22b表达载体转入大肠埃希菌BL21中诱导表达PCT蛋白,经Ni-NTA亲和层
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目的:原核表达人降钙素原(procalcitonin,PCT)重组蛋白,制备高纯度的PCT单克隆抗体。方法:将构建的PCT-pET22b表达载体转入大肠埃希菌BL21中诱导表达PCT蛋白,经Ni-NTA亲和层析法纯化,用蛋白质印迹法和胶体金法对其进行鉴定。获得的PCT重组蛋白采用长程免疫法皮下多点注射Balb/c小鼠,取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选阳性杂交瘤细胞株并进行亚克隆4次。将细胞株注入小鼠腹腔收集腹腔积液获得单克隆抗体,经辛酸硫酸铵法和Protein G亲和层析法进行纯化。结果:
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