【摘 要】
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目的：构建小牛凝乳酶原乳酸克鲁维酵母分泌型表达载体,表达重组凝乳酶原。方法：通过PCR获得小牛凝乳酶原cDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pKLAC1α结合因子分泌信号下游,得
【机 构】
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东北农业大学食品学院,哈尔滨工业大学食品科学与工程学院
【基金项目】
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“十一五”国家科技支撑计划项目（2006BAD04A09,2006BAD04A06）
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目的：构建小牛凝乳酶原乳酸克鲁维酵母分泌型表达载体,表达重组凝乳酶原。方法：通过PCR获得小牛凝乳酶原cDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pKLAC1α结合因子分泌信号下游,得到重组载体pKLAC1-prochymosin。SacⅡ线性化后氯化锂转化乳酸克鲁维酵母GG799,用含5mmol/L乙酰胺的YCB固体培养基筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因,利用特异性引物筛选多拷贝转化子。阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做TricineSDS-PAGE分析并检测凝乳酶的活力,通过检测阳性转化子产凝乳
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