【摘 要】
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为建立一种快速、特异、灵敏检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的荧光定量RT-PCR方法,参比NCBI中登录的S基因高度保守核苷酸序列,设计1对针对PEDV S基因的特异性引物和探针,建立TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,建立的方法与猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒不存在交叉反应,具有较强的特异性;最低检测限度为1.
【基金项目】
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贵州省科技支撑计划项目[黔科合支撑(2021)一般162项目];
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为建立一种快速、特异、灵敏检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)的荧光定量RT-PCR方法,参比NCBI中登录的S基因高度保守核苷酸序列,设计1对针对PEDV S基因的特异性引物和探针,建立TaqMan荧光定量RT-PCR方法。结果显示,建立的方法与猪圆环病毒2型、猪圆环病毒3型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪轮状病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪德尔塔冠状病毒不存在交叉反应,具有较强的特异性;最低检测限度为1.0 copies/μL,比普通RT-PCR方法灵敏100倍;批内、批间重复性试验的变异系数分别在1.0%、2.8%以下,具有较好的重复性;对临床疑似样品进行检测,荧光定量RT-PCR方法与普通RT-PCR方法总符合率为80%,阳性符合率为100%。结果表明,建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好。
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