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摘要：目的：探讨核桃分心木提取物总黄酮、总皂苷对家兔心肌缺血再灌注损伤的影响。
方法：30只家兔随机分为5组：假手术组、单纯缺血组、缺血再灌注组、分心木治疗A组和B组。
结果：核桃分心木提取物总皂苷治疗A组、B组与再灌注组相对比，血清中MDA含量明显减少，SOD活性明显增高，A组与B组相比，血清MDA含量和SOD活性差异不显著。
讨论：提示核桃分心木提取物总皂苷可通过某种机制抑制脂质过氧化过程，提高内源性抗氧化酶活性；而减轻心肌缺血再灌注中产生的自由基对心肌细胞的损伤，具有抗氧化作用。
关键词：核桃分心木提取总皂苷；心肌再灌损伤；抗氧化
近年来，心血管疾病成为威胁人类健康的主要原因，而心肌梗阻的发病率亦呈上升趋势，作为治疗理想的手段：溶栓、血管扩张及血管再造，可以有效提高心脏功能，但再灌损伤也越来越被医务工作者关注。寻找新的安全有效的药物用于防止心肌缺血再灌损伤成为医学研究的一个重要内容。而对于再灌注损伤研究发现：缺血再灌过程中，缺血区会产生大量自由基是缺血再灌注损伤的重要机制之一——自由基损伤学说。核桃分心木别名胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔、核桃芯，为胡桃科植物（胡桃Juglans regia L）。果核的干燥木质隔膜，功效固肾涩精，临床主要用于遗精滑泄、遗溺尿频、崩中、带下。目前对于该药材的研究文献较少。随着经济作物在我国的推广，核桃在全国范围内的种植也越来越多，人们对核桃分心木的研究也重视起来。现代科学对核桃分心木的有效成分进行了深入的研究，证实其中含有的总皂苷、总黄酮均有较强的抗氧化作用。许多动物实验和临床研究已经证明：核桃分心木中的总皂苷和总黄酮，有较强的抗氧化活性，可以清除自由基、超氧离子。本实验利用家兔心肌缺血再灌注模型，模拟人类的急性心肌梗死（acute myocardial infacction， AMI）后的溶栓过程，通过检测血清丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，观察其在心肌缺血再灌注损伤的作用，以此来研究开发核桃分心木及连翘的新的药用价值。
一、 材料与方法
（一） 实验动物
成年家兔（体重2200～2900g，普通喂养，购自本地家兔养殖户）。
（二） 实验设备与主要试剂
DH145型小型动物呼吸机、巴比妥钠、核桃分心木、SOD试剂盒、MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
（三） 实验方法
1. 核桃分心木中总皂苷的提取：
依据文献[3]方法提取核桃分心木中的总皂苷。
2. 动物准备。
3. 缺血再灌注模型建立：
建立家兔冠脉左前降支（LAD）缺血再灌注模型，按文献方法[4]。
（1）30只家兔耳缘静脉注射2%或巴比妥钠（45mg/kg）麻醉后仰位固定于家兔固定台上。
（2）行气管切开术，并予以人工机械呼吸（啮齿类动物呼吸机，南京医疗设备公司DH145型）潮气量30mL/次，呼吸频率为40次/mim，吸入室内空气。
（3）沿胸骨左（3～5肋）开胸，剪开心包，暴露心脏，于肺动脉圆锥及左心房间找出LAD，在LAD下挂0号线以备可逆性结扎。
（4）分离左侧颈内静脉，以备注药。
（5）于腹主动脉插管，以备取血清MDA含量及SOD活性测定。
4. 实验分组
将30只家兔经上述处理后随机分为5组，每组6只，分组如下：
（1）假手术组，仅置线不结扎LDA，270min后结束实验。
（2）单纯缺血组，结扎LDA30min后结束实验。
（3）缺血再灌注，结扎LDA30min后，再灌240min结束实验。
（4）核桃分心木总皂苷治疗A组，结扎前20min于颈内静脉缓慢注射（10mg/kg体重）结扎30min后，再灌 240min 结束实验。
（5）核桃分心木总皂苷治疗B组，结扎LDA5min后，于颈内静脉缓慢注射分心木总皂苷（10mg/kg体重），结扎 30min 后，再灌240min结束实验。
假手术组、单纯缺血组、缺血再灌组：分别于左侧颈内静脉注射相应量生理盐水作对照。
（四） 观测指标
再灌注240min末，动物心脏取血3mL，以3500r/min离心15min，分离血清，-20℃保存待测。严格按试剂盒说明书，用硫代巴比妥酸法测定MDA含量，用黄嘌呤氧化酶法测SOD活性。
（五） 统计学方法
所有实验数据均用（x±s）表示，采用SPSS140统计学软件进行统计处理，多组间比较用方差分析，P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有极显著性。
二、 结果
核桃分心木总皂苷对血清MDA含量及SOD活性的影响。
各组在实验临结束前于腹主动脉取血清测血清MDA含量及SOD活性。
结果显示：
缺血再灌注组与假手术组、单纯缺血组相比，血清MDA含量明显增加，而SOD活性明显降低（P<0.01）；核桃分心木总皂苷治疗A组与缺血再灌注组相比，血清MDA含量明显减少，而SOD活性明显增高（P<0.05）； 核桃分心木总皂苷治疗A组与B组相比，血清MDA含量和SOD活性无差异（P>0.05）。具体结果见表1。
讨论
如何减轻并防止心肌缺血再灌损伤是目前缺血性疾病防治过程中亟须解决的一个难题，对心肌缺血再灌损伤的作用研究表明，心肌缺血再灌损伤的重要机制之一是氧自由基的生成增多，使脂质过氧化损伤导致脂质过氧化产物丙二醛（MDA）生成增多，SOD活性降低。
本实验结果表明：心肌缺血再灌损伤后血清MDA含量明显增加，SOD活性明显降低，提示缺血再灌可产生的自由基引起心肌缺血再灌损伤，本治疗后明显降低血清MDA含量，提高血清SOD活性，提示核桃分心木提取物总皂苷有抗氧化作用，可使脂质过氧化受抑制，同时提高内源性抗氧化酶活性而减轻氧自由基对心肌的损伤。此抗氧化作用可能是其减轻心肌缺血再灌损伤的机制之一。治疗组A与B相比，血清MDA含量和SOD活性无显著差异，表明核桃分心木总皂苷用于心肌缺血前预防和心肌缺血再灌注前给药均有效，提示核桃分心木总皂苷可能不仅能减轻心肌缺血再灌注损伤，且对心肌缺血再灌损伤有预防性作用。
总之，核桃分心木总皂苷在心血管疾病治疗中具有一定的療效，但具体机制仍需进一步研究。
参考文献：
[1]杜健，汪晨净，景志敏.心肌缺血再灌注损伤中钙超载和氧自由基作用机制研究[J].卫生职业教育，2009，（11）：121-123.
[2]令狐晨，谢姆西努尔·阿卜来提，阿依吐伦·斯马义等.新疆核桃分心木总皂苷和总黄酮的体外抗氧化活性[J].陕西科技大学学报，2016，（1）：134-137.
[3]韩艳春.维吾尔药新疆核桃分心木有效化学成分及其药理作用的研究[D].乌鲁木齐：新疆医科大学，2010.
[4]王军.葛根素注射液对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响[D].长春：吉林大学，2005.
[5]石燕燕，李树青.心肌缺血再灌注损伤治疗进展[J].中国心血管病研究，2007，（10）：777-779.
[6]高元峰，陈兴，陈里新等.红景天苷对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[J].中南药学，2010，8（2）：115-118.
方法：30只家兔随机分为5组：假手术组、单纯缺血组、缺血再灌注组、分心木治疗A组和B组。
结果：核桃分心木提取物总皂苷治疗A组、B组与再灌注组相对比，血清中MDA含量明显减少，SOD活性明显增高，A组与B组相比，血清MDA含量和SOD活性差异不显著。
讨论：提示核桃分心木提取物总皂苷可通过某种机制抑制脂质过氧化过程，提高内源性抗氧化酶活性；而减轻心肌缺血再灌注中产生的自由基对心肌细胞的损伤，具有抗氧化作用。
关键词：核桃分心木提取总皂苷；心肌再灌损伤；抗氧化
近年来，心血管疾病成为威胁人类健康的主要原因，而心肌梗阻的发病率亦呈上升趋势，作为治疗理想的手段：溶栓、血管扩张及血管再造，可以有效提高心脏功能，但再灌损伤也越来越被医务工作者关注。寻找新的安全有效的药物用于防止心肌缺血再灌损伤成为医学研究的一个重要内容。而对于再灌注损伤研究发现：缺血再灌过程中，缺血区会产生大量自由基是缺血再灌注损伤的重要机制之一——自由基损伤学说。核桃分心木别名胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔、核桃芯，为胡桃科植物（胡桃Juglans regia L）。果核的干燥木质隔膜，功效固肾涩精，临床主要用于遗精滑泄、遗溺尿频、崩中、带下。目前对于该药材的研究文献较少。随着经济作物在我国的推广，核桃在全国范围内的种植也越来越多，人们对核桃分心木的研究也重视起来。现代科学对核桃分心木的有效成分进行了深入的研究，证实其中含有的总皂苷、总黄酮均有较强的抗氧化作用。许多动物实验和临床研究已经证明：核桃分心木中的总皂苷和总黄酮，有较强的抗氧化活性，可以清除自由基、超氧离子。本实验利用家兔心肌缺血再灌注模型，模拟人类的急性心肌梗死（acute myocardial infacction， AMI）后的溶栓过程，通过检测血清丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，观察其在心肌缺血再灌注损伤的作用，以此来研究开发核桃分心木及连翘的新的药用价值。
一、 材料与方法
（一） 实验动物
成年家兔（体重2200～2900g，普通喂养，购自本地家兔养殖户）。
（二） 实验设备与主要试剂
DH145型小型动物呼吸机、巴比妥钠、核桃分心木、SOD试剂盒、MDA试剂盒（南京建成生物工程研究所）。
（三） 实验方法
1. 核桃分心木中总皂苷的提取：
依据文献[3]方法提取核桃分心木中的总皂苷。
2. 动物准备。
3. 缺血再灌注模型建立：
建立家兔冠脉左前降支（LAD）缺血再灌注模型，按文献方法[4]。
（1）30只家兔耳缘静脉注射2%或巴比妥钠（45mg/kg）麻醉后仰位固定于家兔固定台上。
（2）行气管切开术，并予以人工机械呼吸（啮齿类动物呼吸机，南京医疗设备公司DH145型）潮气量30mL/次，呼吸频率为40次/mim，吸入室内空气。
（3）沿胸骨左（3～5肋）开胸，剪开心包，暴露心脏，于肺动脉圆锥及左心房间找出LAD，在LAD下挂0号线以备可逆性结扎。
（4）分离左侧颈内静脉，以备注药。
（5）于腹主动脉插管，以备取血清MDA含量及SOD活性测定。
4. 实验分组
将30只家兔经上述处理后随机分为5组，每组6只，分组如下：
（1）假手术组，仅置线不结扎LDA，270min后结束实验。
（2）单纯缺血组，结扎LDA30min后结束实验。
（3）缺血再灌注，结扎LDA30min后，再灌240min结束实验。
（4）核桃分心木总皂苷治疗A组，结扎前20min于颈内静脉缓慢注射（10mg/kg体重）结扎30min后，再灌 240min 结束实验。
（5）核桃分心木总皂苷治疗B组，结扎LDA5min后，于颈内静脉缓慢注射分心木总皂苷（10mg/kg体重），结扎 30min 后，再灌240min结束实验。
假手术组、单纯缺血组、缺血再灌组：分别于左侧颈内静脉注射相应量生理盐水作对照。
（四） 观测指标
再灌注240min末，动物心脏取血3mL，以3500r/min离心15min，分离血清，-20℃保存待测。严格按试剂盒说明书，用硫代巴比妥酸法测定MDA含量，用黄嘌呤氧化酶法测SOD活性。
（五） 统计学方法
所有实验数据均用（x±s）表示，采用SPSS140统计学软件进行统计处理，多组间比较用方差分析，P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有极显著性。
二、 结果
核桃分心木总皂苷对血清MDA含量及SOD活性的影响。
各组在实验临结束前于腹主动脉取血清测血清MDA含量及SOD活性。
结果显示：
缺血再灌注组与假手术组、单纯缺血组相比，血清MDA含量明显增加，而SOD活性明显降低（P<0.01）；核桃分心木总皂苷治疗A组与缺血再灌注组相比，血清MDA含量明显减少，而SOD活性明显增高（P<0.05）； 核桃分心木总皂苷治疗A组与B组相比，血清MDA含量和SOD活性无差异（P>0.05）。具体结果见表1。
讨论
如何减轻并防止心肌缺血再灌损伤是目前缺血性疾病防治过程中亟须解决的一个难题，对心肌缺血再灌损伤的作用研究表明，心肌缺血再灌损伤的重要机制之一是氧自由基的生成增多，使脂质过氧化损伤导致脂质过氧化产物丙二醛（MDA）生成增多，SOD活性降低。
本实验结果表明：心肌缺血再灌损伤后血清MDA含量明显增加，SOD活性明显降低，提示缺血再灌可产生的自由基引起心肌缺血再灌损伤，本治疗后明显降低血清MDA含量，提高血清SOD活性，提示核桃分心木提取物总皂苷有抗氧化作用，可使脂质过氧化受抑制，同时提高内源性抗氧化酶活性而减轻氧自由基对心肌的损伤。此抗氧化作用可能是其减轻心肌缺血再灌损伤的机制之一。治疗组A与B相比，血清MDA含量和SOD活性无显著差异，表明核桃分心木总皂苷用于心肌缺血前预防和心肌缺血再灌注前给药均有效，提示核桃分心木总皂苷可能不仅能减轻心肌缺血再灌注损伤，且对心肌缺血再灌损伤有预防性作用。
总之，核桃分心木总皂苷在心血管疾病治疗中具有一定的療效，但具体机制仍需进一步研究。
参考文献：
[1]杜健，汪晨净，景志敏.心肌缺血再灌注损伤中钙超载和氧自由基作用机制研究[J].卫生职业教育，2009，（11）：121-123.
[2]令狐晨，谢姆西努尔·阿卜来提，阿依吐伦·斯马义等.新疆核桃分心木总皂苷和总黄酮的体外抗氧化活性[J].陕西科技大学学报，2016，（1）：134-137.
[3]韩艳春.维吾尔药新疆核桃分心木有效化学成分及其药理作用的研究[D].乌鲁木齐：新疆医科大学，2010.
[4]王军.葛根素注射液对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响[D].长春：吉林大学，2005.
[5]石燕燕，李树青.心肌缺血再灌注损伤治疗进展[J].中国心血管病研究，2007，（10）：777-779.
[6]高元峰，陈兴，陈里新等.红景天苷对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[J].中南药学，2010，8（2）：115-118.